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药敏试验培养基之争

放大字体  缩小字体 发布日期:2017-11-20  来源:检验视界网  作者:彭交凤   浏览次数:102
核心提示:老师,我记得科室是用血平板做链球菌药敏试验,那肠球菌药敏试验是否也选用血平板?实习生A一脸纠结的问道我还没来得及回应,实习生B立即回复道:我觉得链球菌培养时营养要求高,则应选用血平板,肠球菌在普通营养基上生长良好,所以用MH平板做药敏……
“老师,我记得科室是用血平板做链球菌药敏试验,那肠球菌药敏试验是否也选用血平板?”实习生A一脸纠结的问道

我还没来得及回应,实习生B立即回复道:“我觉得链球菌培养时营养要求高,则应选用血平板,肠球菌在普通营养基上生长良好,所以用MH平板做药敏试验就可以。”

“这个血平板就是我们平时培养细菌的哥伦比亚血琼脂平板(CNA)吗?”实习生A继续问道。

“好像是的!”实习生B不肯定地回答。

听到两位实习生的对话,我对他们的求知和疑问精神表示欣赏和支持,但是也很担忧,他们对临床微生物学最常规的药敏感性试验—纸片扩散法(K-B法)的基本知识巩固不牢固,对药敏平皿的认识和选择处于混淆不清状态,会直接导致药敏结果的不准确,延误患者的正确治疗。之后,我为他们讲解了K-B法药敏平皿的要求与原则,具体如下:

药敏试验培养基的选择具有一定的原则和要求,不以个人经验或爱好而更改。为了使临床试验和医疗保健服务水平具备一致的标准,许多国家或机构制定了不同的参照标准。由于参照标准有所差异,故药敏培养基的要求也有所不同。我国药敏试验结果判断标准参照美国CLSI标准文件,则要求除了特殊菌群,K-B法所用的培养基必须是M-H培养基;英国参照的标准BSAC则要求培养基为ISO培养基,而M-H营养琼脂只适用于葡萄球菌的药敏试验。因此在工作中,我们要严谨的参照CLSI,根据不同菌群的需求选择合适、正确的药敏培养基。

培养基的成分和质量是保证药敏结果准确性的先决条件。培养基对药敏结果的影响因素具体如下:

1、pH:pH的变化可导致抑菌圈直径变大或变小。
2、培养基中含有能拮抗菌药活性的物质:如钙、镁离子能降低氨基糖苷类药物的抗菌活性。
3、培养基的厚度:标准厚度为4mm,厚度>4mm,抑菌圈则会变小,<4mm,则会变小。
4、培养基的湿度:使用药物平皿前一般先在室温平衡半个小时,使培养基表面干燥,培养基湿度过高不利于细菌的生长或对抗菌药起到稀释作用。
5、培养基的硬度:硬度过高不利于抗菌药在琼脂中的扩散,可导致抑菌圈直径变小。
6、营养条件:营养条件太差不利于细菌的生长,抑菌圈直径变大;反之,培养及营养条件太好会让抑菌圈直径变小。

将这些原理和原则解说后,针对他们对话中的问题,我一一进行了剖析:

根据CLSI,绝大多数细菌药敏试验琼脂均为标准的M-H琼脂,M-H琼脂基本不含有抑制磺胺类药物和四环素类药物抗菌活性的物质,可满足大多数细菌的生长需要,肠球菌对营养要求不高且生长速度较快,因此可选用M-H琼脂(MHA),而不是血平皿。对于大多数细菌,MHA是不需要添加羊血,血液或血清中的蛋白会不同程度结合抗菌药分子,影响了抗菌药物的活性,如羊血中的某些成分可抑制磺胺类药物和四环素类药物抗菌活性,同时也可影响新生霉素、萘夫西林及头孢菌对肠球菌的药敏结果。

溶血链球菌、肺炎链球菌等营养要求高的苛养菌则需要使用M-H琼脂+5%脱纤维羊血培养基,也叫M-H药敏试验血琼脂平板(MHBA)。MHBA与普通的分离细菌的血平板或者哥伦比亚血平板(CNA)虽然长相相似,但配方及产业标准(如pH、湿度等)均不一样,是不能相互代替使用的。为了比较肺炎链球菌ATCC49619在MHBA和 CNA培养基上的药敏结果,在其他条件均一致的情况下我们分别用MHBA和CNA做了药敏试验,结果发现,CNA的药敏结果抑菌圈直径偏大,细菌生长情况较差,从而导致“假敏感”结果。

因此,作为一名合格的微生物检验人员,我们应该时刻遵守操作规程,牢记标准要求,熟读规则原理,杜绝含糊不清、似是而非,才能确保结果的准确性。


【本文系作者彭交凤授权检验视界网发表,并经检验视界网编辑,转载请注明作者、出处和本文链接

 
 
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