常用HE试剂的配制__技术专栏_检验视界网
热搜: 肺癌  同型半胱氨酸  淀粉  结核  尿酸  精准医疗  hpv病毒  公司  癌症  肿瘤标志物 
 
罗氏电化学发光免疫分析仪清洗液、耗材
 
当前位置: 首页 » 技术专栏 » » 正文

常用HE试剂的配制

放大字体  缩小字体 发布日期:2014-11-20  来源:病理世界
核心提示:一、 苏木素(1) Harris苏木素(退行性染色):配方:苏木素 1 g 无水乙醇 10 ml蒸馏

常用HE试剂的配制

一、 苏木素

(1) Harris苏木素(退行性染色):

配方:

苏木素 1 g 无水乙醇 10 ml

蒸馏水 200 ml 硫酸铝钾 20g HgO 0.5 g

先将苏木素溶于无水乙醇中,备用。把硫酸铝钾(起媒染作用。媒染剂:凡能与染料与组织结合,生成色淀,并促进染色的金属离子盐类或金属原子的含氧酸)放入蒸馏水,加热溶解,再加入备用的苏木素,煮沸 2 分钟,先加入少量的氧化汞,防止氧化过程中苏木素外溢,玻棒搅拌,然后,边搅拌边加入氧化汞。加完后,立即移至冰水中,加速其冷却,静置一夜后,过滤。用前以 5% 的比例加入冰醋酸。如配好后时间较长,冰醋酸的量可适当多加一点。冰醋酸的量,可直接影响苏木素的着色能力和清晰度。加少了,会造成核浆共染,背景不干净;加多了,核着色能力下降。此液可放置3月至半年左右,视气温而定。使用期要看染色的切片量来定:以每天100张片的量,可使用半个月左右。


(2)Gill改良苏木素液(进行性染色):

苏木精 2 g 无水酒精 250 ml

硫酸铝 17.6 g 蒸馏水 750 ml

碘酸钠 0.2-0.3 g 冰醋酸 15-25 ml

先将苏木精溶于无水酒精,硫酸铝溶于蒸馏水,然后两液混合后加入碘酸钠,最后加入冰醋酸。此液为半氧化进行性苏木素液,不会产生沉淀,氧化膜少。常有人配制此液染不上色或染色较慢,可能是碘酸钠量的原因,可根据气温变化多加一点(气温在30度时,一般碘酸钠量为0.25 g,气温每降低5度,可增加0.01 g,反之可减少)。有人用硫酸铝钾代替硫酸铝,也可以,着色能力略强于硫酸铝,染液会产生沉淀和结晶。也可以采用加温溶解配制,可促进氧化,增强着色能力。

Gill改良苏木素液色浅的原因与其苏木精、硫酸铝的量少也有关,因此我们对配方略作改良:

苏木精 4 g 无水酒精 250 ml

硫酸铝 36g 蒸馏水 750 ml

碘酸钠 0.4 g 冰醋酸 15-25 ml


此配方需要分化。

二、伊红

(1)伊红(水溶性)

配方:

伊红 (水溶性) 2 .5 -5g

蒸馏水 500 ml

将水溶性伊红溶于蒸馏水中,然后加浓盐酸10毫升,充分搅拌,静置过夜后过滤。过滤后的沉淀用蒸馏水冲洗二次,再过滤;将沉淀物连同滤纸一起放入温箱内干燥,加95%酒精1000毫升,配成饱和液。使用前再用95%的酒精 1:1~2倍稀释,加入1~2%冰醋酸(促染剂:只能增加染料的着色能力,但不参与染色反应的物质)。

此方法具有染色时间快,颜色鲜艳,不容易褪色,使用寿命长等特点。

(2) 伊红(醇溶性)

配方:

伊红 (醇溶性) 2.5-5 g

95%酒精 1000 ml

加冰醋酸10滴(0.5ml),冰醋酸过多,可导致染浆时细胞核酸化。

伊红的染色速度,与其pH值相关,pH越酸,染色速度越快,pH在

3.5左右,染色时间只需2-3秒,当pH在6.5左右,染色时间要2-3分

钟。由于胞浆的等电点pH为4.7-5.0,故伊红pH以4.5左右为适。

我们在日常工作中1000 ml95%酒精中加0.8 g醇溶性伊红,机器

染色1000张切片左右(每天)更换,结果更稳定。

三、 固定液:

(1)12% 中性福尔马林液 (pH7.0)

甲醛 120 ml

NaH2PO4•H2O 4 g

Na2HPO4 13 g

蒸馏水 880 ml

(2)12% 酸性福尔马林液(PH 2.5-3.0)

甲醛 120 ml

水 830 ml

冰醋酸 30-50 ml

(3)12% 福尔马林液

甲醛 120 ml

水 880 ml

(4) Bouin 固定液

饱和苦味酸 85 ml

甲醛 10 ml

冰醋酸 5 ml

四、 脱钙液:

(1)10 % 盐酸甲醛脱钙液

浓盐酸    10 ml

甲醛 10 ml

水 80 ml

(2)30 % 盐酸脱钙液

浓盐酸   30 ml

水 70 ml

(3)10 % 硝酸脱钙液

浓硝酸    10 ml

水 90 ml

(4) Bouin 固定液

饱和苦味酸 85 ml

甲醛 10 ml

冰醋酸 5 ml

在众多脱钙液中,以硝酸为最强,在脱钙过程中,要经常用大头针对

骨组织进行针刺,如果能容易刺进了,就说明脱钙完成了,就应该立

即中止脱钙。较硬的骨组织应该用10 % 硝酸脱钙,一般4-24小时。

一般钙化或少量骨组织,可用30 % 盐酸脱钙,一般12-36小时。骨髓

组织可用10 % 盐酸脱钙,一般12-24小时。

脱钙结果后,必需流水冲洗4-8小时,才能再进行固定、脱水。

五、1% 盐酸酒精分化液:

浓盐酸          1 ml

75%酒精          99 ml

六、清洗液:

30%盐酸或者用5%苯酚水溶液浸泡24小时,取出后充分水洗。此法

可用于盖玻片或载玻片处理。



 
 
[ 技术专栏搜索 ]  [ 加入收藏 ]  [ 告诉好友 ]  [ 打印本文 ]  [ 关闭窗口 ]

 
0条 [查看全部]  相关评论

 
推荐图文
推荐技术专栏
点击排行
 
网站首页 | 关于我们 | 联系方式 | 使用协议 | 版权隐私 | 网站地图 | 网站留言 | 京ICP备08103280号