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浅谈荧光原位杂交技术在白血病中的应用

放大字体  缩小字体 发布日期:2015-06-05  来源:搜狐健康
核心提示:荧光原位杂交(Fluorescence In Situ Hybridization,简称FISH)技

荧光原位杂交(Fluorescence In Situ Hybridization,简称FISH)技术是运用碱基互补配对的原则,以核酸探针来检测染色体上相应序列的改变。由于其直观、快速、敏感性高和特异性强,越来越被广泛应用,尤其是在血液学领域中。

因不同类型的白血病有其特异的染色体异常,FISH在白血病诊断,治疗监测,预后估计和微小残留病检测等诸方面都正成为不可缺少的重要手段。

1、白血病的诊断

白血病的细胞遗传学研究已经发现了许多白血病特异的染色体易位,为疾病的诊断和特异治疗提供了依据。用FISH进行融合基因检测比常规的染色体核型分析要准确,其敏感性虽略低于RT- PCR方法,但其假阳性和假阴性率却大大低于PCR法。常规细胞遗传学分析常有一些染色体易位不易发现或有不明来源的标志染色体或有复杂的染色体易位不易诊断,FISH则可解决这些难题。白血病的染色体异常分为染色体数目异常和结构异常。对数目异常,可采用染色体着丝粒探针,慢性粒细胞性白血病急变时常常出现8号染色体三体,此时8号着丝粒探针就很容易诊断了。染色体结构异常就比如CML病人初诊时95%的病人都会出现t(9;22)(q34;q11)的异常,那我们就可以用BCR/ABL融合基因探针检测,就会一目了然是否出现此异常。

2、预后估计,治疗监测和微小残留病检测

白血病的预后估计,治疗监测和微小残留病检测都基于某种类型白血病特异的染色体或基因改变,如对M3病人首先检测是否伴有t(15;17)/ PML-RARA或t(11;17)/PLZF/RARA,如果有PML-RARA 融合基因则用全反式维甲酸治疗预后好,而伴有PLZF/RARA则预后较差且需选择其它治疗方案。初发时检测出的异常可作为治疗监测和随访过程中检测微小残留病变的有效指标,进行跟踪监测,在疾病初发和每次开始治疗前检测有否分子遗传学异常非常重要。还有经常遇到的异性别移植患者,移植后对患者是否移植成功及后期监测,都可以使用CEPX/Y探针。

与染色体检测技术比较:FISH技术,尤其间期FISH,只需分析间期细胞,不用经过培养寻找可供分析的中期分裂相,每例次可分析间期细胞500-1000个,而染色体检测按照国际标准分析20个细胞,有些病人甚至因自身及培养原因都找不到20个细胞,相比较,FISH技术敏感的多,灵敏度可达到10-3,更适用于残留白血病的监测;由于间期FISH使用的是特异性探针,人为的判断误差大大减小,信号的识别技术对技术员要求并没有染色体检测那么高,而且出结果快速、重复性好;但FISH技术也有其局限性,要指定基因特异性的探针,相对于染色体检测来说,可以更精确和更精细地对基因进行定位分析,但失去了核型分析的宏观性。

与PCR技术比较:RT-PCR敏感性高和易于开展,但也常出现假阳性和假阴性问题,影响了其准确性,并且无法量化;实时PCR很好地解决了量化的问题,其缺点是成本较高;间期FISH不仅具有可量化和假阳性、假阴性率低的优点,且其敏感性仅比PCR方法略低,完全符合临床诊断的需要,应用不同颜色的荧光探针还可同时检测多个基因异常。

综上所述,FISH在血液病中的应用相当广泛,由于FISH具有直观、敏感、方便、可量化和方法多样,适应不同检测的目的等优点,随着FISH技术的发展,成本的降低和探针种类和质量的进一步提高,FISH必将成为血液病临床及基础研究的重要手段。

 
 
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