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自动生化分析仪参数设置

放大字体  缩小字体 发布日期:2015-12-01  来源:网络
核心提示:基本原理及主要参数了解生化分析仪基本参数的原理,有利于仪器、试剂的正确使用,有助于正确分析和处理测定数据。生化分析仪根据自动化程度分半自动和全自动,从目前试剂盒供应情况来看,主要的测定方法为:终点法(包括一点终点法和两点终点法)、速
基本原理及主要参数

了解生化分析仪基本参数的原理,有利于仪器、试剂的正确使用,有助于正确分析和处理测定数据。生化分析仪根据自动化程度分半自动和全自动,从目前试剂盒供应情况来看,主要的测定方法为:终点法(包括一点终点法和两点终点法)、速率法(连续检测法)、速率两点法(两点法),后两种统称动力学法。

主要参数设置的技巧

方法类型可根据试剂盒要求或反应原理来设置。对于半自动生化分析仪终点法只是一点终点法,全自动生化仪单试剂选择一点终点法,而双试剂选择两点终点法。大多数酶学测定使用速率法,尿素氮、肌酐测定等用两点法。

分析方法的种类

1、一点法
又称为终点法。指加入标本和试剂后,当反应达到一定阶段时(或终点)测定吸光度值计算待测物质浓度的方法。主要用于总蛋白、白蛋白、血糖、甘油三酯和胆固醇等项目测定。

2、二点法
在反应过程中测定两个时间点的吸光度(A1、A2),利用二者的差值(A1-A2)计算待测物质浓度的方法。二点法又称为二点终点法,使用双试剂进行分析时多彩二点法,加入标本和第一试剂测定一次吸光度,加入第二试剂(启动试剂)待反应完成时测定另一个吸光度,两者的差值可消除标本内源性物质的干扰。主要用于总胆红素、直接胆红素、甘油三酯和胆固醇等项目的测定。

3、二点速率法
在反应过程中选择适当两点测定其吸光度,计算出单位时间(常为分钟)内吸光度的变化量,通过吸光度的变化量计算待测物质浓度的方法。二点速率分析法主要用于Jaffe法测定肌酐。

4、速率A法
根据酶促反应的特点,当底物浓度足够大,当酶促反应达到最大时,单位时间内底物的消耗量和产量的生成量维持不变,即单位时间内吸光度变化值不变,在酶促反应的零级反应区内选取两个时间点,计算出每分钟吸光度变化,吸光度变化值同酶活性大小成正比。速率A法常用于酶活性的测定。

以上各种分析法可同时选用双波长法。双波长法指在测定时选择主波长和副波长,主波长用于待测物质的测定,而副波长用于消除可能产生的干扰。副波长选择原则为干扰物质在主波长和副波长的光吸收相等,而等测物质有最小的吸光度,两波长不能相隔太近。

吸样量

主要是针对流动比色的全自动或半自动仪器的参数,原则是吸人量不得大于或等于反应液总体积,否则会导致吸空形成比色池气泡,最好留100~200ul的余地。

检测时间

酶促反应延迟期后,在过量底物的存在下,反应速率加快并达到一个反应速率稳定的阶段,即酶促反应以恒定的速率进行,不受底物浓度的影响,这段时间称为线性反应期或零级反应期,自动化生化分析仪的监测时间即为此期。测酶的连续监测法至少90—120s或至少4点(3个AA),少于3个△A不能称为连续监测法,因为不能计算线性度。监测时间过长则容易发生底物耗尽,可测范围变窄。

标准液浓度

一点法和两点法必须设置标准,选择合格的标准品很重要。有些试剂盒配有标准液,但是部分项目标准液定标偏差太大,校准液复溶后分装冷冻保存,只要复溶的水质保证,避免反复冻融,校准的结果还是很满意的。注意校准液靶值获得的方法学,方法不同耙值是有差异的,比较典型的是ALP测定有IFCC和DGKC法,差异比较大,不可简单套用。2.9 K值速率法测定无需带标准或做标准曲线,首先确定样本量和工作试剂量,再根据被测物质的摩尔消光系数,就可按速率法计算公式计算出因素K值了。K=TV×10。/(8×SVXL),TV为反应液总体积,sV为样本体积,L为比色杯光径(em),£为毫摩尔消光系数。

试剂吸光度上下限

有的生化仪要求设置试剂吸光度上下限,主要是用来监测试剂的质量的,但是试剂吸光度上限和下限不是试剂质量的唯一指针。因此,一定的校准频率和室内质控是质量保证的必需手段。我们在实际工作中就遇到酶活力测定的试剂空白数据在规定限值内,但质控物测定结果连续偏低,病人结果因每天标本少而难以判断,最后发现是试剂质量下降。

线性范围

试剂盒的线性范围与试剂质量、反应时试剂样品比有关,应实测试剂盒的线性范围。当样品浓度低于线性下限应增加样品量重测,而高于线性上限则应稀释后重测。使用任何一种方法测定某待测物时,待测物都有一个可测定的浓度或活性范围,样品结果若超过此范围,仪器将显示测定结果超过线性范围的提示,多数分析仪会自动将样品减量或增量重新测定。

总结

自动生化分析仪的参数设置,包括分析方法、波长、吸样量、检测时间、标准液浓度、试剂吸光度上下限以及线性范围,缺一不可,不同仪器的参数设置可能有所差异,本文就贝克曼DXC系列的设置做下简易的说明。

 
 
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