检验视界网用户3群

关注微信公众号
精彩内容天天送
热搜: POCT  糖化血红蛋白  尿酸  PCT  同型半胱氨酸  胱抑素  血常规  APTT  地中海贫血  性激素六项 
 
 
当前位置: 首页 » 技术专栏 » 正文

化学发光假阳性本底产生的原因分析

放大字体  缩小字体 发布日期:2017-12-04  来源:IVD星火
核心提示:近期收到有小伙伴提问,关于如何解决发光试剂盒研发过程中的本底偏高和假阳性问题。解决问题最重要的是了解问题产生的原因,本微信平台分类汇总了化学发光试剂产生假阳性本底的原因,由于问题本身并没有很具体的描述,因此本文也只广泛的汇总,不包……
近期收到有小伙伴提问,关于如何解决发光试剂盒研发过程中的本底偏高和假阳性问题。解决问题最重要的是了解问题产生的原因,本微信平台分类汇总了化学发光试剂产生假阳性本底的原因,由于问题本身并没有很具体的描述,因此本文也只广泛的汇总,不包含具体的项目或者方法学方面的内容。希望对大家的工作有所帮助。

抗原/抗体原料因素

融合表达蛋白对抗原特异性的影响。融合蛋白包含载体的一些序列,比如可以与血清中抗大肠杆菌的因子发生反应而产生假阳性。

合成蛋白原料错误排序或突变。合成蛋白在制备过程中,以下情况可能会导至原料特异性改变而产生假阳性:a.核苷酸发生相位改变;b.某些蛋白肽序列错误;c.核苷酸出现点突变。

人抗鼠抗体效应(HAMA效应)。鼠源性单抗对人体具有异种蛋白的免疫原性,因此部分假阳性反应由于人对鼠抗体反应HAMA(人抗鼠抗体效应)引起,当试剂中的阻断剂效果不理想时,检测样本就会出现高阴或假阳性。

抗原/抗体纯度对特异性的影响。目前原料制备的纯化工艺有限,原料中的其它杂蛋白可引起假阳性。

人血清中的IgG

正常人血清中的IgG:IgG浓度对抗体检测有较大的影响,尤其是间接法检测抗体项目。成人血样中的IgG浓度为7~16.5mg/ml,个别样本的IgG浓度会更高,这些样本检测时易显示假阳性。

人血清中异常的 IgG:孕妇怀孕期间会产生特殊抗体;自身免疫性疾病易引起抗体检测假阳性,如:当患有类风湿关节炎、结缔组织病等病症时,血清中的异常IgG升高会引起本底升高或假阳性。

样本处理不当引起


样本中的纤维蛋白原:如果血液样本凝固不完全,血清中仍留部分纤维蛋白原,在化学发光测定过程中,磁微粒和纤维蛋白原形成肉眼可见的纤维蛋白块,易造成高阴或假阳性结果。

样本溶血:样本中红细胞破裂,血红蛋白逸出称红细胞溶解,简称溶血。当检测样本溶血时,血红细胞中的亚铁血红素具有过氧化物酶的作用,其通过吸附或者 “PP” 效应,易引起假阳性免疫反应。

样本染菌:细菌污染样本时,菌体中或细菌分泌物中可能含有某些物质,会产生假阳性反应;

样本保存时间过长:在冰箱中保存时间过长导至血清IgG聚合,易使间接法等的试验本底加深;

操作不当

任何不符合规范的操作都会影响检测结果,因此在实验操作过程中应该严格保证操作的规范性。

严格按照仪器和试剂说明书进行实验操作是得到准确结果的关键。

全自动化学发光平台,已经大大降低了手工操作引起的各种操作问题和实验结果误差,但是仍然有一些需要注意的事项,避免引起本底的升高或者假阳性。

使用样本量不足的样本:当样本量不足,加样模块识别不够精密时,样本中的血红蛋白或凝胶就会被当成样本吸入加样,导至磁微粒凝集成块,造成高阴或假阳性结果。

洗涤不充分:稀释洗液的水应该是新鲜的纯化水,电导率小于1.2μs。如果水中含有过多的金属离子,这些离子会占用表面活性剂,影响洗涤效果。如果洗液被微生物污染,不仅洗涤效果会受很大影响,还会带来其他干扰物质。

加样针、反应杯等耗材:加样针、反应杯应保证干净无污染。

实验室环境:应注意避免84消毒液等强氧化剂消毒液影响实验反应。

 
 
[ 技术专栏搜索 ]  [ 加入收藏 ]  [ 告诉好友 ]  [ 打印本文 ]  [ 关闭窗口 ]

 
0条 [查看全部]  相关评论

 
推荐图文
推荐技术专栏
点击排行
 
网站首页 | 投稿须知 | 关于我们 | 联系方式 | 定向服务 | 版权隐私 | 网站地图 | 网站留言 | 京ICP备08103280号