多种干扰因素会影响免疫学检测结果，贯穿分析前、中、后各环节。《免疫学检测的干扰因素和处理策略专家共识》（2024年）发布，主要内容如下：
▌共识一：应及时准确识别可能存在的干扰因素
当免疫学检测结果出现与临床表现不符、检测结果为极值等异常时，应怀疑存在干扰因素。常用识别方法有复测法、不同检测系统重测和稀释法。自身抗体或嗜异性抗体的识别有直接检测和阻断法。大分子干扰物识别主要包括：鉴别巨分子促甲状腺激素等大分子干扰的混合法、沉淀回收试验以及凝胶过滤层析法。
▌共识二：可从预防和方法学改进2个方面入手，降低类风湿因子对免疫学检测的干扰。
类风湿因子属于自身抗体，可干扰抗原、抗体的结合而影响检测结果。
●捕获法测定IgM抗体，类风湿因子与Ig发生聚集，出现假阳。
●类风湿因子与信号抗体或捕获抗体结合，形成空间位阻，阻碍捕获抗体-抗原-信号抗体复合物的形成，使检测信号变弱，引起假阴结果。
●ELISA夹心法试验中类风湿因子可结合固相抗体与酶结合物显色，出现假阳性。
●有研究发现，类风湿因子会对ELISA检测D-二聚体、乙型肝炎标志物、TSH、cTnI、甲状腺激素、性激素结合球蛋白、脂肪酶、TORCH IgM抗体、糖类抗原CA 19-9等产生明显干扰。
●类风湿因子可造成免疫比浊法的部分结果假性增高。
类风湿因子与类风湿性关节炎、EB病毒感染等疾病密切相关，因此需紧密结合患者病史及其他实验室检测结果，综合分析类风湿因子对结果的干扰。
改进措施：
●使用阻断试管采集标本，或加入封闭阻断剂；
●用25% PEG6000沉淀类风湿因子，振荡混匀10 s，10 000×g离心5 min，取上清进行检测；
●用0.9% NaCl溶液预稀释样本，减少类风湿因子对IgM抗体检测的干扰；
●在样本稀释液中添加经热变性处理的IgG；
●将动物血清、抗人IgM或抗人IgG加至标本中；
●添加2-巯基乙醇（终浓度为0.1 mol·L-1），以降解IgM型类风湿因子。
▌共识三：人抗动物抗体和嗜异性抗体对免疫学检测的干扰类似，可通过相似的途径减少干扰。
嗜异性抗体是人体产生的能与其他动物Ig结合的抗体，通过结合IgG的Fc段来结合检测系统的标记抗体或捕获抗体，引起假阳性或假阴性结果。嗜异性抗体会对人绒毛膜促性腺激素、促卵泡激素甲状旁腺激素、TSH、促肾上腺皮质激素等检测造成干扰。也可导致免疫透射比浊法的假阳性结果。
人抗动物抗体与嗜异性抗体具有一定同源性，大多与动物Ig治疗或接触史相关，人接触动物2周后会产生抗体，可存在30个月。
改进措施：
●通过超速离心（10 000×g离心10 min）减少干扰；
●用PEG6000预处理标本，沉淀嗜异性抗体或人抗动物抗体，离心去除沉淀后再检测；
●在标本中加入过量的动物Ig吸附嗜异性抗体或人抗动物抗体；
●用Protein A/G等方法降低干扰；双位点检测中推荐使用两步法检测，且在第1次洗板后加入阻断剂。
▌共识四：应降低自身抗体对免疫学检测的干扰。
自身抗体的靶抗原是自身成分，大部分为IgG型，自身抗体与靶抗原结合会形成复合物，对靶抗原的测定结果造成负干扰。此外，巨分子TSH是抗TSH自身Ig与TSH结合形成的免疫复合物，会造成TSH假性升高。
改进措施：检测时可在标本中加入25% PEG 6000，离心去除沉淀后，取上清进行检测。另外，也可用pH值为3.0的洗脱液解离抗原抗体复合物，或用解离液（0.3% Triton X-100，1.5% CHAPS，15% SDS）解离标本中的免疫复合物后再测定；或将100 μL标本与50 μL解离液混匀，56 ℃处理30 min，以降低自身抗体的干扰。
▌共识五：应降低补体对免疫学检测的干扰。
急性炎症、组织损伤、风湿免疫病等均会导致血清补体升高，ELISA检测系统的酶结合物也可诱导补体活化。此外，抗体结构的变化可促进补体1q与Ig Fc片段结合，从而出现假阳性结果。另外，活化的补体可与固相抗体结合，抑制抗体和抗原的特异性反应，导致假阴性结果。
检测标本时，可56 ℃ 30 min加热血清，以灭活补体系统；还可用乙二胺四乙酸稀释标本，终浓度为10～40 mmol·L-1的乙二胺四乙酸可灭活补体。另外，紫外线照射、机械振荡等其他措施也可灭活补体。
▌共识六：应采取相应措施准确测定激素。
检测标本时，可通过蛋白变性或加入阻断剂抑制激素与蛋白结合。
▌共识七：应采取有效措施降低脂血对免疫学检测的影响。
脂血是临床检验常见的干扰。研究发现，轻度脂血可对时间分辨荧光分析法测定游离雌三醇产生显著正干扰，中重度脂血会对中高水平游离雌三醇测定产生明显的负干扰。
1）应空腹采血；
2）将常规离心后的标本加盖密封，进行真空超速离心或高速离心后，检测下层清液；
3）用PEG 6000预处理脂血标本，沉淀含载脂蛋白B的脂蛋白，除高密度脂蛋白外，大部分脂质会被沉淀；
4）可采用超滤、血清稀释、磷钨酸-镁法、乙醚提取、脂质清除剂（如LipoClear）等措施处理高脂血标本，减少乳糜对检测结果的影响。
▌共识八：应采取有效措施降低黄疸对免疫学检测的影响。
黄疸标本也经常出现在临床免疫学检验中。肝胆疾病、自身免疫性溶血可引起胆红素升高，未结合和结合胆红素浓度的异常升高可引起假阴性结果。
1）用正常体检者血清作稀释液，对标本进行倍比稀释，确定最佳稀释倍数，以减少黄疸对检测结果的干扰；
2）设置合适的副波长，如540 nm；
3）可添加胆红素氧化酶，以降低胆红素的干扰。
▌共识九：可选择特异性强的抗体，采用凝胶色谱层析法从标本中提取待测物后，再进行检测，以降低交叉反应物质对免疫学检测的干扰。
▌共识十：可用卵白蛋白和Cu2+将溶菌酶封闭，阻断其桥连作用，从而降低溶菌酶对免疫学检测的干扰。
▌共识十一：可用0.9% NaCl溶液稀释标本后再测，以降低M蛋白对免疫学检测的干扰。
▌共识十二：应采取有效措施降低生物素对免疫学检测的干扰。
生物素与被标记物之间可能存在空间位阻，干扰免疫检测结果。生物素干扰与待测物水平无关，但与生物素浓度和标本加样量相关。
改进措施：
●在患者使用生物素前或停用2～3天后采集标本。
●使用非生物素-链霉亲和素免疫检测法复测。
●用链霉亲和素包被的磁珠与含生物素血清孵育后离心，检测上清。
●根据抗体分子的可标记基团和酸碱性选择合适的活化生物素。在生物素与被标记物之间加入交联臂，减少空间位阻。
▌共识十三：应及时识别和纠正ALP对免疫学检测的干扰，以提高检测结果的可信度。
ALP是免疫学检测中常见的标记酶，由其引起的干扰主要与交叉反应有关。在免疫分析中，抗体的特异性不足可能会导致ALP与其他结构相似的物质发生交叉反应，从而产生假阳性结果。
▌共识十四：应采取有效措施来降低吖啶酯对免疫学检测的干扰。
▌共识十五：可使用不依赖于钌标记的检测平台或采用PEG6000沉淀降低三联吡啶钌对免疫学检测的干扰。
当患者体内存在抗钌抗体时，可能导致假阳性或假阴性结果。如，在甲状腺功能检测中，抗钌抗体可能与三联吡啶钌标记的TH抗体或钌交联复合物发生反应，导致信号降低，引起FT4或FT3浓度假性升高，最终误诊为甲状腺功能亢进。
▌共识十六：应采取有效措施降低溶血对免疫学检测的干扰。
除体内溶血原因外，采样不当、低渗溶液、机械性强力振荡、突然冷冻（-20～-25 ℃）或解冻等均可引起溶血。溶血导致的血红蛋白（hemoglobin，Hb）释放会对免疫学检测结果产生正向或负向干扰。
●导致电化学发光法检测肌红蛋白和心肌肌钙蛋白T结果偏低，即使是轻度溶血。
●导致ELISA检测人类免疫缺陷病毒抗体结果假性偏高，而对化学发光法检测人类免疫缺陷病毒抗体的结果影响则较小。
●溶血会导致定量化学发光免疫法测定胰岛素、C肽的结果偏低、叶酸的、铁蛋白结果偏高。
因此应规范标本采集、运输、处理流程，必要时重新采集标本复查。另外，在报告检测结果时要注意溶血的影响，并在数据中标注。
▌共识十七：应采取有效措施降低纤维蛋白对免疫学检测的干扰。
在没有促凝剂和抗凝剂存在的情况下，正常血液标本会在采集2 h后完全凝固。在临床检验工作中，对未充分凝固的血液进行离心会导致纤维蛋白原残留，形成肉眼可见的纤维蛋白块，易造成假阳性结果。纤维蛋白会造成TH假性偏高，对固相双位点化学发光法测定HCG产生负干扰。
1）采集血液标本时添加促凝剂，或直接用带分离胶的采血管；
2）待血液标本完全凝固后再离心；对于接受抗凝治疗的患者，血液凝集会延迟，需要更长的凝血时间；
3）4 ℃过夜后，再离心标本；
4）对于肝素治疗的患者，其血液标本可能会凝固不全，应在肝素治疗前采集标本；
5）将标本转移至离心管内，以≥10 000×g离心10 min。
▌共识十八：应规范标本前处理流程，保证样品合格，降低对免疫学检测的干扰。
1）采用洁净容器和新鲜标本，及时检测；
2）若需在5 d内检测，可将标本于4 ℃短暂冷藏；若在1周后检测，则需冻存。
▌共识十九：应规范实验操作流程。
某些外源性雌激素类、孕激素类，或具有雄激素效应的物质，会通过污染加样吸头或反应杯导致性激素和鳞状细胞癌抗原检测假阳性。
1）实验操作时必须佩戴手套，必要时戴口罩，避免皮肤直接接触加样吸头或反应杯；
2）保持实验室清洁，避免加样吸头或反应杯受灰尘污染；
3）如质控品等意外溅撒，应及时清洁通风。
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内容来源 | ivd行业的硬菜、IVD工具人
图片来源 | veer、ibaotu
排版 | jinbao
审校 | 金宝
