检验科「生化定标」做什么？

因为生化分析仪检测的数值是吸光度（A）值，而检验报告单显示的是浓度值（或活力单位）。定标，就是要找出一个参考点，就是一个K值（或F值）。

它是由仪器与试剂状态确定下来的,当我们测定一个标本时，无论是用手工的方法或全自动生化分析仪，测出来的值只是一个吸光度，这个吸光度对我们没有什么意义，我们要把这个吸光度值转化成一个浓度或酶的活性，那就要乘上一个K值（或F值）。

定标，即测定已知浓度（或活力单位）的校准品，根据生化仪测得的吸光度，进行拟合，得到浓度和吸光度之间的关系曲线—校准曲线，将样本+试剂反应的吸光度带入校准曲线，就可以得到浓度。

数据拟合又称曲线拟合，俗称拉曲线，是一种把现有数据透过数学方法来代入一条数式的表示方式。科学和工程问题可以通过诸如采样、实验等方法获得若干离散的数据，根据这些数据，我们往往希望得到一个连续的函数（也就是曲线）或者更加密集的离散方程与已知数据相吻合，这过程就叫做拟合(fitting)。在数值分析中，曲线拟合就是用解析表达式逼近离散数据，即离散数据的公式化^[1]。

定标类型通常由试剂厂家提供相应参数，下列定标类型以AU5800为例。

1、单个浓度标准品定标：标准类型为AB，如GLU、TP、ALB、UA、UREA等项目检测。计算公式为Y=AX+B，定标时以水作为零点，标准液作为另一点，建立标准曲线。

2、多个浓度标准品定标：定标类型为5AB或6AB,定标品浓度常用倍比稀释梯度递减，如APOA1、APOB、LP（a)、CRP、PA等项目检测。计算公式为样条函数法（spline）。

3、两个浓度标准品定标：定标类型2AB,常用于Hcy、FMN、HDLC、LDLC等项目检测。计算公式为折线法（polygonal）。

4、MB类型因子: 其实就是人工定标的因数，也就是手工输入常数K值。当选择MB定标时常数K必须输入,常用于连续监测法测定酶类，如ALT、AST、ALP、GGT、CK等项目检测。

K值分为计算K值和实测K值,以ALT例：先测定在线性范围内每分钟吸光度的变化（ΔA/min），以U/L代表酶活性浓度时，则可按下式进行计算：

U/L=△A/min×K==△A/min×Vt×1000/(Lp×ε×Vs)

式中Vt：反应总体积（ml）

Vs：样品体积（ml）

ε：对NADH的毫摩尔吸光系数6.22；1000：将U/ml转换成U/L

Lp：比色杯光径（cm）^[2]

当条件固定时，从理论上讲Vt、Vs和Lp均为固定值，ε值为常数，所以常数K是恒定的。

常数K值的选择很重要，比值过高虽然测定的线性范围较宽，但重复性差，反之，虽然精密度好，但线性窄。

K值设置的首先发点应是测定酶的判断值或参考值上限，应保证这些值测定的可靠,所以转氨酶的常数K一般在3000左右^[3]。

实测K值是用含有酶项目的定标液实际测出K值。

K值的稳定性主要取决于仪器与试剂，如果仪器与试剂都十分稳定，K值也就稳定。

本科室使用的定标液为试剂厂家随试剂盒配送的单个项目定标液。试剂为开放性试剂，试剂会因新旧试剂混用或载机时间过长，导致试剂空白每天都在变化，所以本科室生化室项目定标明确规定每个项目的定标频率，这样可避免工作人员忙于检测样本，长时间未定标而忽略不易觉察的结果漂移，可减少室内质控失控。

1、速率法项目如ALT、AST、CK等项目大多用水空白定标，水空白定标易操作，每天定一次；

2、室内质控较稳定的的项目如TP、ALB、GLU等项目每周定标一次分天进行。如周一定标TP、ALB、

UREA、CREA、UA；周二定标GLU、Fe、Ca、P、CO2。因上述项目需加定标液才可定标，有些定标液还需倍比稀释，如采取每天所有项目定标会导致开机后准备时间过长，不能及时检测样本。

3、室内质控不稳定的项目,如Hcy，采取隔天定标一次，以保证室内质控结果在控。

4、室内质控失控项目排除仪器、质控品、试剂加错等原因外，追加该项目定标。

5、试剂换新批号需追加该项目定标。

6、仪器进行较大的维修、维护与保养或者更换了重要部件，可能影响检测性能，需重新对所有项目定标。

1、定标所用的比色杯报警错误，比色杯透光率不合格，原因是比色杯有污物附着，如果清洗比色杯后仍然报错，需考虑更换比色杯。

2、添加试剂时未混匀或混匀不足导致定标失败。

3、重复性不好，定标品没有混匀或者试剂稳定性较差，可通过精密度实验排查原因。

4、试剂因载机时间过长细菌繁殖造成污染，常见于HDLC或LDLC试剂污染后会由无色变为明显可见的蓝黑色。污染试剂取出，放入新试剂后重定标。

5、试剂是否放置错误，重新放置正确试剂。

6、定标液是否开瓶时间过长细菌污染造成定标不过或定标不准确。

7、定标液赋值不准确，在实际工作中会遇到个别项目反复定标室内质控仍失控，排除仪器、试剂等因素外，可采取系数校正、对定标液重新赋值等措施纠正为在控，可采取方法如下：

1、采用酶法测定的项目（ALT、AST、GGT、ALP）可以通过调整其计算因子K来达到目的。新的计算因子K=（质控液靶值/质控实际测量值）*计算因子K（现在的）。改完之后，再重新做质控，看看质控是否在控。

2、或在设置测试项目参数界面,相关系数（Correlation Factor）：利用直线方程Y=AX+B，进行斜率A和截距B的修正，仪器分别默认为1和0，需要修改其中的A值。新的A=（质控液靶值/质控实际测量值）*A（现在的），改完之后再重新做质控，看看质控是否在控。