两种隐血试验结果截然不同，到底谁对谁错？

作者：朱名超天门市第一人民医院检验科 4380 2022-04-20

粪便隐血试验（occultbloodtest，OB）是通过化学或免疫学手段检测粪便中是否含有少量红细胞，一种非侵入性检查方法，其操作简单易为患者接受，常作为对慢性消化道出血的诊断及消化道恶性肿瘤的筛选[1]。

因此隐血试验结果对临床医生诊治疾病有着非常重要的作用，然而我们在工作中经常会遇到一些疑惑，当两者隐血试验检测方法结果不同时该如何报告的问题。

前几天我们科室就遇到一个这样的案例，下面小编就带大家一起聊一聊。

一个同事在隐血试验，先是用免疫胶体金法检测5个样本中有3个阳性，分别是1、2、5号阳性，但是5号明明是明显的柏油样便，为何做出来弱阳性，于是他有用化学法纸片做了一个验证，看看是不是试剂有问题，结果出乎意料，居然变成了2、3、5阳性，1号阴性，5号强阳性了（如图1、图2）。1号和3号结果完全相反？难道加错样了，他又重做一遍，结果依然如此。

图1 免疫胶体金法

图2 化学法结果

他找到我，问问原因，我说这个很正常，免疫胶体金法的特异性和敏感性均高于化学法，免疫法是基于抗原抗体检测的基础建立的，抗原抗体结合具有特异性，而化学法是通过血红蛋白的类过氧化物酶反应的一种显示法，容易受到铁剂、维生素C等化学物质的干扰。不信，你可以看看试剂盒说明书，他们的检测限是不一样的。

于是，我们找来试剂盒说明书，我们看到了免疫法的最低检测限是0.2ug/mL，而化学法（匹拉米洞法）最低检测限是50ug（Hb）/g（stool），如下图3、图4

图3 化学法（匹拉米洞法）说明书

图4 免疫胶体金法

二者换算一下，以水的密度来计算（水的密度为1g/cm³，那么1g水的体积等于1g除以1g/cm³，所得结果是1cm³，而1cm³=1毫升，所以1毫升等于1g），0.2ug/mL≈0.2ug/g，那么相当于免疫法的敏感性是化学法的250倍，因此现在可以看到差距了吧。解决了敏感性这个问题，那就找到了为什么3号样本免疫胶体金法阳性，而化学法阴性的问题（假阴性）。

第二个问题为何2号样本免疫胶体金法阴性，而化学法阳性？

首先，我们来看看经典的隐血试验——化学法。化学法原理：血红蛋白中的亚铁血红素有类过氧化物酶的活性，能催化H2O2作为电子受体是色原物（邻联甲苯胺）氧化而显色（如邻联甲苯胺氧化为邻甲偶氮苯显蓝色）^[2]。本法原理与之类似：利用匹拉米洞当作呈色指示剂，在酸及H2O2的作用下，与血红蛋白反应，产生紫蓝→紫红的颜色，据此来进行判读及对阳性结果半定量。

第二个问题的原因还是从说明书上找，化学法（匹拉米洞法）说明书（图5）注意事项中明确写出，“检验前2 天内建议应禁食动物血、脏器及含叶绿素类食物；铁剂、中药、维生素C 等药品，以尽量避免出现假阳性结果。”因此这些可能导致假阳性结果。

图5 化学法（匹拉米洞法）说明书

而免疫法具有特异性，说明书（图6）上明确标识“特异性检测人血红蛋白，与动物500ug/mL的动物血红蛋白（鸡、鸭、猪、牛、羊）、500ug/mL肌红蛋白、1000ug/mL维生素C、含过氧化物酶的10%白菜提取液、1000ug/mL硫酸亚铁、10%金银花提取液均无交叉反应”。那么结果可想而知应该以免疫法结果为准。

图6 免疫胶体金法

第三个问题，为何柏油样便的5号样本，免疫法做出来是阴性的？这个问题学免疫的同事肯定知道答案，那就是我们常见的钩状效应（Hook效应），还是说明书上可以快速找到问题的关键。

图7 免疫胶体金法

出现柏油样便，血红蛋白浓度超出2000ug/mL，就会出现Hook效应（图7），需要将样本进行5-10倍的稀释后重测。我们将样本进行了4倍稀释后，结果为阳性。如图8

图8 免疫胶体金法（稀释4倍结果）

在我们日常工作中，如果遇到两种检测方法结果不一致时，一定要记得查看我们的试剂盒说明书，说明书是最直接、最准确能够帮我们快速找到问题答案的捷径，化学法与免疫法之争，在我们的教材和很多文献^[3-6]中都已有描述，但是对于很多基层检验工作者来说，仍然有很多应用和解读的误区，因此，掌握好我们检验的基础理论的同时，还有将理论与工作实践相结合起来，否则，可能会导致自己无法解释的错误。检验人既要细心，耐心，和爱心，还要“有心”。做一个“有心”，有温度的检验人。

编辑：骆秉涵

【来源：检验医学】

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