什么鬼？多个标本结果显示 0 ？

作者：山西晋城大医院检验科  张丽霞 胡伟燕 郭威 赵妮妮 赵丹丹 原凌雁

临床中经常用生化检验为患者疾病诊断和预后提供依据，这就要求临床生化检验结果必须准确。作为检验人就必须在生化检验的每一个环节中严格遵守操作规范，提高自身业务水平，保证给临床提供及时、准确、高效、科学的检测结果。相信反应曲线对于部分检验人来说是有点陌生的，但是反应曲线在生化检验中却有着极为重要的意义，它能够对标本检测结果异常、试剂变质、生化分析仪不稳定等情况进行反应，有助于发现检验中的问题，提高临床生化检验的准确性。

2018年7月4日，在我们生化组发生了一件奇怪的事情，同事和我反映同型半胱氨酸（HCY）早上质控做的挺好，结果在控，上标本时却发现有多个标本出现0umol/L的结果，复查后结果有较大差异。作为专业组组长我让大家立即把所有做过的标本重新检测，发现其他项目检测结果重复性都很好，唯有HCY重复性差。随即我们对HCY进行定标，定标过后对所有检测项目重新做了室内质控，结果发现其他项目全部在控，HCY却失控了。和科室领导汇报后，马上启动了应急方案，把所有标本转移到其它生化仪上进行检测，以保证报告单的及时准确发放。

接下来我们开始了原因调查，考虑因为在同一台分析仪上其它项目重复性、质控都没问题，只有HCY重复性不好，质控不稳定，因此可以基本排除仪器的问题，难道是试剂的问题吗？HCY是在罗氏的开放通道上做的，试剂不是原装试剂，需要手工加试剂，会不会是在试剂加注时被污染了呢？怀着这样的疑问，我们立即更换了试剂，把原来的试剂弃去，加入新的试剂，重新上机、定标、做质控，结果在控，但重复性检测还是不好，这使我们的困惑越来越大，到底还有什么原因会导致这样的结果呢？这个问题该怎么解决呢？突然一个念头一闪而过，只是更换试剂，没有更换试剂盒，会不会是试剂盒被污染了呢？我想着还是先看看反应曲线在下定义吧！HCY检测，为三试剂反应，两点速率法是采用一种或多种试剂检测两个测量点检测固定的间隔时间内两点的吸光度变化。换算成D Abs/min参与计算在加入最后最后一个试剂之后进行吸光度检测。

调出反应曲线如下：

异常反应曲线图1

图1结果显示为0umol/L。通过反应曲线，我们明显可以看出图1中吸光度的变化分三段，第一段为试剂1与样本混合液的吸光度；第二段，加入试剂2后，吸光度迅速下降在一个低水平，很显然是和试剂2发生了反应，但是试剂2是没有底物的，理论上吸光度不应该下降这么快，因此高度怀疑为试剂污染，而且是被试剂3污染；第三段，加入试剂3后，吸光度是没有变化的，即试剂3未参与反应体系，反应受影响而出现0umol/L的结果。

正常反应曲线图2

图2结果显示为30.29umol/L。通过反应曲线明显可以看出吸光度的变化分三段，第一段为试剂1与样本混合液的吸光度；第二段，加入试剂2后，吸光度先下降后保持在一个低水平，处于一个平衡状态；第三段，加入试剂3后，吸光度以一定速率下降，这样的反应曲线是正常的。

综合两个反应曲线我们终于找到了问题所在，基本可以确定为因试剂污染而导致试剂盒污染从而出现了这样的结果。于是我们更换了试剂盒重新注入了新的试剂，定标、做质控、重复性检测，结果一切正常。大家终于松了口气，项目可以正常运行了。回顾这次事件发生的原因，完全是由于人为因素引起的，由于开放通道试剂都是手工加注，因此操作者加错试剂就会引起试剂的污染从而导致试剂盒被污染。从本案例的反应曲线分析试剂2很可能被试剂3污染，因为根据检测原理只有加入试剂3后氨在谷氨酸脱氢酶的作用下，使NADH转化为NAD，样本中的HCY浓度与NADH转化速率成正比，而图1异常反应曲线就是在试剂2加入后吸光度发生极大的变化，样本中的HCY已经和试剂中的底物发生反应，但试剂参数的读数点是在加入试剂3后第24点和36点读取吸光度值，从反应曲线上看图1加入试剂3后是没有吸光度值得变化的，所以结果出现0 umol/L的现象。但是这个反应曲线是错误的，不符合逻辑的，因此结果自然也是不准确的。

随着自动化的发展，人工更多地被全自动替代，从样本上机检测到得出检验结果，这期间的所有的检测程序均由检验仪器来完成，很容易出现盲区，因此需要我们检验工作者加强监控，当出现问题是，合理分析反应曲线，正是行之有效的方法。通过反应曲线分析，可以帮助我们直观地分析检测的反应过程，快速锁定失控或错误发生的原因，反之，如果不借助反应曲线分析，而只是简单地重复测定或进行定标，不仅会费时费力，而且会增加额外成本投入。当然还有一些开放通道的试剂是需要人工加注的，这就需要大家细心、认真、有责任心的去完成，一次小的疏忽很可能会造成很大的隐患和浪费。总之，如果每一个检验人都能对反应曲线做出合理的分析和判断，这类问题将会从根本上解决。

编辑：Nicole  审校：小米

来源：检验医学网