免疫室内质量控制的标准操作程序

　　【目的】

　　保证ELISA检测结果准确可*, 充分发挥其方法学的优点。

　　【该SOP变动程序】

　　本标准操作程序的变动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。

　　【方法】

　　【分析前质控】

　　1. 人员培训

　　实验是人操作的，因此检验人员需经过培训，熟练掌握本专业如下几方面的技术知识：

　　[1] 检验项目的基本原理 （ELISA原理）；

　　[2] 临床意义；

　　[3] 熟悉检测技巧，了解易出差错的环节及难点；

　　[4] 熟悉检测试剂性能（包括试剂盒组成，包被片段及其组成）；

　　[5] 熟悉检测仪器的原理及性能；掌握数据处理的能力和质量控制知识。

　　[6] 某些特殊项目的检测如抗HIV等需经有关部门组织的专门培训班，考试合格后持证上岗。

　　2. 室内质控血清的制备：

　　[1] 收集阳性血清(无明显溶血、黄胆、脂肪血和污染血清,到一定量（够本室使用3-6个月的量）；

　　[2] 传染性病毒阳性需经56℃、10小时灭活后使用；

　　[3] 过滤，除纤维沉淀物；

　　[4] 稀释，用正常人血清或10%小牛血清PBS溶液稀释；

　　[5] 测定值，与定值参考品进行对比、求值，一般定在Cut Off值附近的阳性值；

　　[6] 分装小瓶（每日用量），加盖、贴签，-20℃冻存备用

　　【试剂盒选择】

　　卫生部规定乙肝试剂，丙肝试剂，艾滋病试剂，梅毒试剂及血型试剂必须使用经卫生部生物制品检定所检定合格，并贴有防伪标签的产品。

　　【试剂盒评价】

　　试剂评价需要有权威的血清考核盘（Panel）进行检测，价格昂贵，操作繁琐，一般实验室不易开展，可以通过以下信息，了解试剂质量。

　　1.根据该试剂生物制品鉴定所的批批检定报告，了解其质量水平，按照质量计划选择灵敏度高的或特异性高的试剂；

　　2.通过询问试剂包被物的组成，如原料来源（基因工程或合成多肽），片段的组合（按比例混合或化学合成），片段的长短等判断试剂的优劣；

　　3.参考室间质评报告中对试剂的评价结果，了解不同试剂的质控成绩。

　　4.根据权威部门发布的试剂评价结果，了解市场上试剂的质量优劣。

　　【仪器质控】

　　为使仪器保持最佳工作状态应建立维护和校正仪器的标准操作程序（SOP），所要控制的仪器包括移液器（加样枪），水浴箱（温箱），洗板机和酶标仪。

　　1.移液器：ELISA加样量小（5-100ｕl），其准确性直接影响实验结果，利用称重法检查：吸取刻度指示量的水，万分之一天平称重后计算吸量是否准确，一般应在±10%以内；

　　2.水浴箱：经常检查水浴箱温度计所示的温度和水中（或温箱内）实测温度是否一致，允许有±1℃的误差；

　　3.洗板机：每个厂家设置洗板后的残留液有各自的规定一般不超过2ul ，人工扣板时，垫纸不湿，定期检查管孔是否堵塞；

　　4.酶标仪：经常维护其光学部分，防止滤光片霉变，定期检测校正，使其保持良好的工作性能。酶标仪的主要性能指标有：测读速度、读数的准确性、重复性、精确度和可测范围、线性等等。优良的酶标仪的读数一般可精确到0.001，准确性为±1%，重复性达0.5%。

　　酶标仪的可测范围视各酶标仪的性能而不同。普通的酶标仪在0.000~2.000，新型号的酶标仪上限拓宽达2.900，甚至更高。超出可测上限的A值常以"*"或"over"或其它符号表示。应注意可测范围与线性范围的不同，线性范围常小于可测范围，比如某一酶标仪的可测范围为0.000~2.900，而其线性范围仅0.000~2.000，这在定量ELISA中制作标准曲线时应予注意。

　　【酶标仪校正程序】

　　1.滤光片波长精度检查：将不同波长的滤光片从酶标仪上卸下，用UV-2201型紫外-可见分光光度计（波长精度±0.3nm）于可见光区对每个滤光片进行扫描，其检测值与标定值之差为滤光片波长精度。一般酶标仪无585nm滤光片，可选用550nm或630nm滤光片。450nm 滤光片的检定选用普鲁兰溶液（校正波长为630nm）。

　　2.通道差与孔间差检测：通道差检测是取一只酶标板小孔杯（杯底须光滑，透明，无污染以酶标板架作载体，将其（内含200ul甲基橙溶液吸光度调至0.500A左右）置于8个通道的相应位置，蒸溜水调零，于490nm处连续测三次,观察其不同通道的检测器测量结果的一致性，可用极差值来表示。孔间差的测量是选择同一厂家，同一批号酶标2板条（8条共96孔）分别加入200ul甲基橙溶液（吸光度调至0.100A左右）先后置于同一通道，蒸溜水调零,于490nm处检测，其误差大小用±1.96s衡量。

　　3. 零点飘移（稳定