过氧化物酶染色（Washburn法）标准操作规程

　　1. 实验原理:粒细胞和部分单核细胞的溶酶体颗粒中含有过氧化物酶，pox能分解H2O2释放出新生氧，使四甲基联苯胺氧化成联苯胺蓝，后者与亚硝基铁氰化钠结合，再进一步氧化形成稳定的蓝色物质，沉淀于酶活性的细胞质内

　　1.1 实验原理:粒细胞和部分单核细胞的溶酶体颗粒中含有过氧化物酶，pox能分解H2O2释放出新生氧，使四甲基联苯胺氧化成联苯胺蓝，后者与亚硝基铁氰化钠结合，再进一步氧化形成稳定的蓝色物质，沉淀于酶活性的细胞质内。

　　2. 标本采集

　　2.1 病人准备：了解病人是否对局麻药有过敏史。凝血因子严重缺陷引起的出血性疾病，穿刺部位有炎症或有畸形，晚期妊娠妇女作骨髓穿刺时要慎重。

　　2.2 标本种类：新鲜抽取的骨髓穿刺液

　　2.3 标本采集要求

　　2.3.1 高压消毒的穿刺针，一次性无菌手套和抽取骨髓液的无菌注射器。

　　2.3.2 临床上首选穿刺部位为髂后上棘；翻身困难，需多部位穿刺患者可选择髂前上棘为穿刺部分。小于3岁的小儿还可选择胫骨头内侧为穿刺部位。

　　3. 标本储存：室温避光处保存，若不能及时测定，可采用95％乙醇固定2分钟，可保存数天。

　　4. 标本运输：室温运输

　　5. 标本拒收的标准：溶血、稀释标本不能作测定。

　　6. 试剂

　　6.1 试剂名称：血细胞pox染色试剂

　　6.2 试剂生产厂家：上海太阳生物技术公司

　　6.3 试剂组成

　　试剂1：poxⅠ液（紫红色）2℃-8℃避光保存，有效期六个月。

　　试剂2：poxⅡ液（无色）2℃-8℃避光保存，有效期六个月。

　　试剂3：95％乙醇，室温避光保存。

　　试剂4：瑞氏染液，室温避光保存。

　　7. 操作步骤

　　7.1 新鲜涂片滴加Ⅰ液数滴（覆盖血膜为宜），室温放置1分钟，勿冲洗即滴加Ⅱ液数滴，混合后室温放置5分钟，流水冲洗。

　　7.2 滴加95％乙醇脱色，水洗后瑞氏染色，复染后镜检观察结果。

　　8. 结果判断

　　8.1 阳性—细胞内出现棕黄或蓝黑色颗粒沉淀物质，定位于胞质。

　　8.2 阴性—细胞内无棕黄色或蓝黑色颗粒。

　　9. 临床意义

　　9.1 粒细胞系统呈集中状粗颗粒强阳性反应，单核细胞系统呈弥散状颗粒弱阳性反应，部分原始单核细胞可呈阴性反应。网状细胞及吞噬细胞有不同程度的阳性。

　　9.2 淋巴细胞系、红细胞系、巨核细胞系、浆细胞系等均为阴性反应。

　　10. 操作性能：快速简便，特异性强，灵敏度高。

　　11. 方法局限性

　　11.1 标本应新鲜，且未受其他化学物的污染。若标本采集后不能及时测定，可采用95％乙醇固定2分钟后，可保存数天。

　　11.2 双氧水（Ⅱ液）最适浓度为0.05mol/L左右，浓度过高，将会抑制酶的活性。

　　12. 参考文献

　　谭齐贤主编﹒临床血液学和血液检验﹒人民卫生出版社，2002，北京：46-47