分子诊断临床应用ABC

分子诊断的概念

分子诊断学是以分子生物学理论为基础，利用分子生物学的技术和方法来研究人体内源性或外源性生物大分子和大分子体系的存在、结构和表达调控的变化，为疾病的预防、预测、诊断、治疗和转归提供信息。

以往对疾病的实验室诊断是基于疾病的表型改变，如对糖尿病的诊断，要检测患者的血糖和糖化血红蛋白是否已升高到一定的浓度。分子诊断主要以引起疾病的基因为检查对象，属于病因学诊断，对疾病的检测结果不仅具有描述性，更上升到了预测性。分子诊断不仅可对有表型改变出现的疾病做出准确诊断，还可对疾病基因型的变异做出诊断。

分子诊断往往能发现疾病发生的真正原因，被认为是“更深层次”的实验室诊断技术。但是，基因检测发现了问题，并不一定说明患者就已经发生疾病了，可能只是潜在的病患。只有引起疾病的基因在人体内表达，并引起人体机能改变时，才可能发生疾病。

分子诊断技术种类

分子诊断是当代医学发展的重要前沿领域之一，其核心技术是基因诊断，常规技术有聚合酶链反应（PCR）等（如下图所示）。这些技术各有特点，其中以PCR技术在临床实验室的应用最为广泛。

分子诊断技术应用领域

分子诊断主要是指通过对编码与疾病相关的各种结构蛋白、酶、抗原抗体、免疫活性分子基因的检测，为临床提供疾病诊断的依据。

PCR产品占据目前分子诊断的主要市场，基因芯片是分子诊断市场发展的主要趋势。PCR产品灵敏度高、特异性强、诊断窗口期短，可进行定性、定量检测，可广泛用于肝炎、性病、肺感染性疾病、优生优育、遗传病基因、肿瘤等，填补了早期免疫检测窗口期的检测空白，为早期诊断、早期治疗、安全用血提供了有效的帮助。

基因芯片是分子生物学、微电子、计算机等多学科结合的结晶，综合了多种现代高精尖技术，被专家誉为诊断行业的终极产品。但其成本高，开发难度大，目前产品种类很少，多用于科研和药物筛选方面等。

如何阅读PCR检测报告单

一张规范的PCR检测报告单，除去规定的患者信息外，还必须有以下内容。

1.检验项目　如乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸（HBV-DNA）、丙型肝炎病毒核糖核酸（HCV-RNA）等。

2.检测结果　表达方式用X×10n copies/ml（拷贝/毫升），或XE+00n copies/ml（拷贝/毫升，用科学数据表达），现在常用表达方式为X×10n IU/ml（国际单位制），或X E+00n IU/ml（国际单位制，用科学数据表达）。

3.参考值（或用检测下限） 一般为<1000 copies/ml (或1.00E+003 copies/ml)。

上述结果，多数患者，甚至部分医师可能看不懂。乙肝PCR检查是针对乙肝患者的HBV-DNA定性或定量检测，参考值（现在一般用检测下限）定性阴性，定量为1000copies/ml（但也有定为500 copies/ml，取决于使用的试剂不同）。如果检查结果大于参考值就表明患者HBV-DNA为阳性，反之则为阴性。HBV-DNA阳性的患者，说明体内病毒复制活跃，传染性强。

此外乙肝PCR检查还能检查体内乙肝病毒的数量，当乙肝患者体内数量较多的时候需要进行相应的抗病毒治疗。

荧光定量PCR检测,是反映被检标本中病毒DNA/RNA存在的多少，结果通常用数字表示(即X×10n copies/ml 或X×10n IU/ml)。定量检测结果主要是对抗病毒治疗疗效提供监测和参考。

HBV-DNA和HCV-RNA的定量单位在报告单上通常用“copies/ml”，表示每毫升的血清或血浆中病毒基因组的个数。该数据越大，表明病毒在人体内的复制越活跃。例如“HBV DNA=4.3×103 copies/ml”代表每毫升血清中有4300个乙肝病毒。

判断血清或血浆中病毒含量主要看上式中的“10n”，n越大，表示含量越高。治疗过程中，n变小说明病毒的复制得到控制，治疗有效。如果病毒含量下降至n<3，说明病毒基本得到控制。如果病毒含量被报告“低于检测下限”，则说明病毒在血清或血浆中不存在，也有可能表示病毒的复制已经被抑制，数量很低，目前的方法已检测不到。

正确采集标本，确保检验结果准确可靠

1.标本采集的时间

在进行分子诊断时，应规定标本采集的时间。这种规定一方面是便于患者与检验人员做好准备，集中收集标本及时检测，尤其是RNA标本应在采集后及时处理以防RNA的降解。人的汗液，甚至空气中，都可能含有RNA酶，当RNA遇到RNA酶时会降解，造成检测结果误差。另一方面，应考虑疾病发展过程中，标本采集过早或过晚都可能出现假阴性结果。比如，获得性梅毒分三期，Ⅰ期（初期）梅毒，外生殖器溃疡渗出物中有大量的梅毒螺旋体（TP）；Ⅱ期（中期）在梅毒疹与淋巴结中存在大量的TP；Ⅲ期（晚期）病变波及全身组织器官，病损处TP少。

2.标本的类型和采集量

标本的类型和采集量应根据所检测的病原体而定，并且重视和考虑同一病原体感染部位不同所采集的标本类型亦不同。比如结核病，肺部结核应取深部晨痰；神经系统结核应取脑