志贺氏菌属检验的标准操作程序
【目的】
指导检验伤寒、副伤寒沙门氏菌。
【该SOP变动程序】
本标准操作程序的改动,可由任一使用本SOP的工作人员提出,并报经下述人员批准签字:专业主管、科主任。
【标本的采集】
由受检者将采便用已蘸有甘油盐水的棉棒自行插入肛门内,轻轻转动,然后取出,插入带有编号的塑料试管中,交给检验科人员。
【检验程序】
采便→立即划线接种SS平板→培养后挑取可疑菌落接种三糖铁斜面及半固体培养基→生化学试验→血清学试验→报告检验结果。
【操作步骤】
1.分离培养
采便后立即用采便棒划线接种SS琼脂平板。36±1℃培养18-24小时,挑取无色半透明的光滑菌落分解乳糖或迟缓分解乳糖的光滑菌落,接种三糖铁斜面及半固体,36±1℃培养18-24小时。
2. 生化学试验
凡是三糖铁反应符合志贺氏菌属特征者(斜面产碱或不变色,底层产酸,H2S(—),产气(—),但福氏6型产生少量气体)、无动力、革兰氏阴性杆菌、作V-P试验,苯丙氨酸,赖氨酸,柠檬酸盐,葡萄糖铵试验。其结果全部阴性者,作血清学试验。
3. 血清学试验
挑取三糖铁斜面上的培养物,按下列顺序作玻片凝集试验:
四种志贺氏——→福氏————→宋内氏————→志贺氏————→志贺氏
多价血清 多价血清 血清 2型血清 1型血清
∣ + ∣ +∣ +∣ +∣
—∣ ↓ ↓ ↓ ↓
∣ 福氏菌 宋内氏菌 志贺氏2型 志贺氏1型
↓ 1-6型 某型+
鲍氏 7-11型 某组+:组内分型血清———→鲍氏某型
血清 : 12-15型 全部—:加热破坏K抗原,重做凝集试验
16-18型
福氏菌的鉴定:凡是与福氏多价血清凝集的菌株,可先用3、4,群6,群7,三种因子血清检查,根据群因子血清反应结果,再用型因子血清检查。福氏菌抗原成分如下
福氏志贺氏各菌型与五型抗原成份
( )内的抗原可能不存在。
4.菌型的判定和结果的报告
根据生化学试验和血清学分型试验结果,判定菌型,报告结果。
【质量控制要求】
4.本程序所用的培养基及试剂依据中华人民共和国国家标准《食品卫生检验方法》微生物部分(GB4789-84)规定的方法配制的,或由省食品卫生监督检验所,省卫生防疫站推荐的合成培养基。
5.增菌及分离必须保证一个一支增菌管,一块平板,禁止多人一管,多人一块平板。
6.分离平板时平板一半以上应有孤立菌落,以供挑选。