血清GHb、龈沟液IL-1β及TNF-α含量检测及其关系的研究
摘要 目的 通过分别检测正常对照组，糖尿病患者及糖尿病合并牙周病组糖化血红蛋白的水平以及龈沟液中的IL-1β和TNF-α的含量，进一步探讨检测相关指标的意义及其相互关系 方法 运用高效液相层析法、ELISA法及放射免疫法分别测定各组血清糖化血红蛋白（HbA 1c）、龈沟液IL-1β及TNFα的水平 结果 2型糖尿病组与2型糖尿病合并牙周病组的血清糖化血红蛋白（HbA1c）、龈沟液IL-1β及TNFα的水平均明显高于正常对照组（P<0.01），2型糖尿病合并牙周病组的龈沟液IL-1β及TNFα的水平明显高于2型糖尿病组（P<0.01），而两组间的血清糖化血红蛋白水平相差不显着（p>0.01） 结论 糖化血红蛋白可为评估血糖的控制情况提供可靠的实验室指标，检测TNFα与IL-1β含量水平对于糖尿病的诊断及治疗提供有力的指导，为临床上诊断及防治糖尿病的并发症提供新的思路。
关键词 糖尿病 牙周病 糖化血红蛋白 白细胞介素1β 肿瘤坏死因子α
近年来随着经济水平的提高以及饮食习惯、饮食结构的变化，糖尿病在我国人群中发病率有上升趋势。牙周病作为糖尿病的第六大并发症，在糖尿病的诊疗过程常被忽视。本文通过分别检测正常对照组，糖尿病患者及糖尿病合并牙周病组血清糖化血红蛋白的水平以及龈沟液中的IL-1β和TNF-α的含量，进一步探讨检测相关指标的意义，并试图阐述其相互之间的关系，为临床的有效治疗提供指导。
对象和方法
1．检测对象：
（1）正常对照组
选取30例（男15例，女15例，年龄21~23岁）全身健康者。受检者符合以下条件：①无系统性全身疾病；②近3个月未使用抗生素及免疫抑制剂；③近6个月未做过公认的牙周基础治疗（包括全口龈上洁治和全口龈下刮治）并未进行过牙周药物及手术治疗；④妇女未妊娠；⑤龈沟深度≤2mm，龈沟探诊不出血，无明显牙龈退缩，牙颈部无龋坏和充填体。每位选取两颗第一磨牙为研究对象。
（2）糖尿病患者组
选取在内分泌科住院且同意参加本研究的2型糖尿病患者30例（男17例，女13例，年龄32~65岁）。受检者符合以下条件：①根据中华医学会糖尿病学分会建议我国人群中采用WHO（1999）的诊断标准，被诊断为2型糖尿病至少6个月以上；②无其他全身疾病；③一直采用口服降糖药物或注射胰岛素治疗，近期病情没有变化；④妇女未妊娠；⑤龈沟深度≤2mm，龈沟探诊不出血，无明显牙龈退缩，牙颈部无龋坏和充填体。每位患者选取两颗第一磨牙为研究对象。
（3）糖尿病合并牙周病患者组
选取在内分泌科住院和在牙周粘膜科就诊且同意参加本研究的患者30例（男18例，女12例，年龄35~65岁）。受检者符合以下条件：①根据中华医学会糖尿病学分会建议我国人群中采用WHO（1999）的诊断标准，被诊断为2型糖尿病至少6个月以上；②无其他全身疾病；③一直采用口服降糖药物或注射胰岛素治疗，近期病情没有变化；④妇女未妊娠；⑤按《牙周病学》诊断标准确诊为慢性中重度牙周病；⑥近6个月未做过公认的牙周基础治疗（包括全口龈上洁治和全口龈下刮治）并未进行过牙周药物及手术治疗；⑦近3个月未使用抗生素及免疫抑制剂。每位患者选取一颗颊侧至少有一个位点的牙周袋探诊深度≥4mm，且牙颈部无龋损和充填体的第一磨牙或第二磨牙。
2．研究方法：
（1）糖化血红蛋白（HbA1c）的测定
采集患者血清，使用日本TOSOH公司生产的全自动糖化血红蛋白分析仪HLC-723G7，运用高效液相层析法测定血清糖化血红蛋白（HbA1c）水平。
（2）龈沟液的采集与定量
去除取样牙面上的大块龈上牙石，棉卷隔湿，无菌干棉球擦干牙面，轻吹牙龈。先用1个已高压消毒烘干的Whatman40#滤纸条（2mm×16mm）插入取样牙的颊侧牙周袋内5秒，取出滤纸条弃之，待3分钟后用2个已高压消毒烘干并称重的Whatman40#滤纸条（2mm×16mm）放入取样牙的颊侧龈沟或牙周袋内的两个位点，放置30秒后取出（若有血和唾液污染，则弃之不用）。将2个已称量的滤纸条再称重，减去原重量，用质量浓度（约1mg/ul）换算成体积，称重的样本立即放入Eppdendorf管中，-70°C冰箱保存。检测时从-70°C冰箱中取出样本，温室解冻，管中按1:100加入PBS缓冲液，室温下放置1小时，再于4°C12000转/分钟离心15分钟，取上清液-70°C冰箱保存，待实验用。
（3）白细胞介素-1（IL-1β）的检测
采用晶美生物工程（北京）有限公司生产的IL-1βELISA试剂盒检测龈沟液中IL-1β含量，实验方法严格按照说明书进行。
（4）肿瘤坏死因子α（TNF-α）的检测
采用北京北方生物技术研究所生产的肿瘤坏死因子放射免疫分析药盒，利用均相竞争抑制原理，采用非饱和法测定龈沟液中TNF-α含量，实验步骤严格按产品说明书进行。
3．统计处理：使用SPSS13.0软件
