生化结果不准,不能全赖底物耗尽

作者:胡正军  浙江中医药大学附属第一医院 2023-02-02

血糖结果出问题
我不赞成解释为“底物耗尽”





1. 某小文:血糖异常增高,解释为底物耗尽引起的,如下:

但是这个患者比较特殊,曾经自己值晚班时遇到该患者血糖极高,一度达到了90mmol/L,生化仪给出了负值结果,最后查出是底物耗尽所致。那这一次是否会再次出现底物耗尽呢?虽然生化仪给出了血糖结果17.08mmol/L。

调取该患者的血糖反应曲线一看,果然不出所料,又是底物耗尽!


2. 先来学习血糖检测的常用方法学

糖的检测目前临床常用无外乎两个方法:①葡萄糖氧化酶法和②己糖激酶法。

且建议使用参考方法己糖激酶法,因为葡萄糖氧化酶法影响因素(还原性物质)更多,而被称为常规方法。

以上两种方法,无论使用哪种,均为终点法(end up),或者现在倾向于称为平衡法。也就是随着反应的进行吸光度增加,达到平衡以反映糖的水平。常常设一个OD的限额,以防止浓度过高而不线性反映糖的浓度值。
这里不存在零级反应,不存在线性期读数,怎么就有“底物耗尽”呢?
我不赞成这里解释为底物耗尽。
3. 再来分析一下文中的反应曲线

①从图中的波长可以看出他们使用的是葡萄糖氧化酶法:指示反应是通过过氧化氢反应生成红色醌类化合物进行显色。

②本来在反应完全时,吸光度(红色)趋于平衡;或者此刻吸光度超过限额(糖极高)而报警。

参照《生化地带》2022-2-25的小文《善用且习惯性使用反应曲线来处理一些异常的生化结果》:糖正常时,吸光度大约0.5;而这个患者的两个胸腹水糖检测的吸光度近2.5,可见该标本的糖的值相当高。


③文中图中显示:色素达到最高峰后回落了,才会导致59mmol/L的血糖被测成17mmol/L。此案例色素(不稳定)达到最高峰后出现褪色现象,可能是因为还原性药物、PH等不明因素引起。

④此处提醒了我们:厂商选择色素原时应该使其足够稳定;通过参数设置保证曲线平衡才能出结果。






尿素结果出问题

也不建议解释为底物耗尽





2023年1月16日写的小文《幸亏标本类型提醒了我》中780 mmol/L的尿素第一次仪器出的结果是小于0.5 mmol/L。

这里的指示反应的NADH被消耗光了。对于第二步反应来说,非常勉强的称为底物耗尽,但是尿素的检测属于代谢物酶法检测,要求的是底物远远小于km。不同于酶活性测定要求的底物所谓无穷大,要求线性期(零级反应)的速率。
所以尿素这里,我也不建议解释为底物耗尽;甚至尿素的方法不建议称为速率法。






酶活性检测中底物耗尽非常的常见





2023年1月17日星期二 11:00,碰到一位危重病人,好几个酶非常增高,顺手拍几张照片,了解一下底物耗尽。

1. LDH原倍的结果:>1000U/L。

曲线在我们监测的22点和28点之间不直,说明患者LDH(其实我赞成缩写为LD)异常增高,过早的消耗尽试剂中底物,使得我们监测的时候反应不在线性。

仪器自动稀释后,反应曲线如下,检测的两个点在线性,能反映酶的浓度。


2. 该患者ALT、AST也异常增高,顺便学习一下曲线:


YP体系监测的点是21点和33点(也就是从图中绿色竖线开始到最后),该患者AST和ALT的反应曲线①在第21点时也都小于设置的限额、②且曲线提前就平了,这就是典型的底物耗尽。

而且我们看看ALT从第21点开始、AST从第19点开始不直。毛估估该患者AST可能更高,再加上LDH极高也,推测酶可能来之于心脏(审报告要懂报告,检验人加油!)。

3. 将该标本AST和ALT进行仪器中的自动稀释,反应曲线如下:


ALT:4117U/L;AST:>4565U/L。果然AST结果更高。

ALT在我们监测的21、33点曲线直了,结果(线性期)可信;AST在21、33点时曲线依然不直,说明浓度极高,自动稀释情况下依然能底物耗尽。

4. 了解一下YP的Flex Rate 
YP的专利技术“线性扩展”,就是提前读数,避开延滞期、避开耗尽期,计算出反应的速度,是可以代表酶的活性浓度。
今天我再去研究一下AST的参数:发现设置的Flex读数是第17点和第22点,就是图中黄色竖线下的曲线。从此图来看黄色两竖线下的曲线:①直、②避开了延滞期和耗尽期,可见由此计算的反应速度可以代表酶的浓度。
是否启用“线性扩展”参数中可以设置:21点之后的吸光度值是否满足条件。本案例原倍的AST的21点很平了,如果从21点开始计算则无法得到正确的速率,这时候启用了Flex(可以出来一个可信的速度)。后续期待好好讲解一下“线性扩展”。



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