抗磷脂抗体检测国际共识指南“出炉”

在第13届抗磷脂抗体国际大会上，由该领域科学家组成的工作组讨论并分析了抗磷脂抗体（aPL）检测标准化相关的关键问题。工作组认为，尽管各个学会都曾发表过该类抗体的检测指南，但尚缺乏统一的国际共识，因此有必要制定并发表关于抗心磷脂抗体（aCL）和抗β2糖蛋白I抗体（抗β2GPI抗体）检测的最佳方案和技术要求的国际共识指南。

该指南将为临床试剂盒终端用户（诊断实验室）和开发人员（包括生产商和科研实验室）提供aCL和抗β2GPI抗体检测的最佳推荐。此外，该指南也对aPL检测结果进行了注解，以协助风湿科医师更好地理解检测技术和结果，从而对抗磷脂综合征（APS）患者做出诊断和治疗决策[论文发表于《关节炎与风湿病》 （Arthritis Rheum 2012，64:1）杂志]。

aCL与抗β2GPI抗体检测指南精要

检测前

样本要求

· 血清：建议用无溶血和无脂样本，避免对样本热灭活（56℃、30分钟）。

· 血浆：厂商必须说明样本类型，包括所用抗凝剂。使用血浆时应考虑抗凝剂所致的稀释作用。样本中血小板含量应低于10000/μl。

检测中

aCL及抗β2GPI抗体亚型测定

· 需要检测aCL及抗β2GPI抗体的IgM及IgG亚型。

· 当其他检测均为阴性但仍怀疑为APS时，则推荐检测aCL和抗β2GPI抗体的IgA亚型。

抗原

· aCL：应使用心磷脂+（牛或人）β2GPI。

· 抗β2GPI：应使用人源性β2GPI，测定时使用负电荷（高结合力或经γ-照射后）板。

结果定量

· aCL：用IgG型磷脂/IgM型磷脂（GPL/MPL）单位表述aCL检测结果（1个GPL/MPL单位代表1 μg/ml亲和纯化的IgG或IgM aCL的心磷脂结合活性），并确立低、中和高度阳性的阈值。

· 抗β2GPI抗体：暂无通用的测定单位，推荐建立国际或通用测量单位。

标准

· 鼓励厂商及检测人员选择可靠的标准品制备二次校准样本（多克隆或单克隆抗体）。

· 二次校准样本须经过公认标准品的对比和验证。

· 如有可能，使用一组患者血清进一步确定检验系统的一致性程度。

· 更重要的是，标准品的生产和质控应遵从美国食品和药物管理局（FDA）药品生产和质量管理指南或与之相当的质量保证方案。

· 从推荐标准到任何再次校准均应做到有据可查（即留有记录）。

标准曲线

· 每次检测均应有标准曲线。

· 须行多点校准，并采用统计学校正的拟合和计算方法。

· 当检测读数与预期值之间的相关系数小于0.90，不能使用该标准曲线。

精确度

· 酶联免疫吸附（ELISA）结果的变异系数（CV）应小于0.10。

· 需多水平（包括低～中滴度阳性界值）评估精确度。

· 对于商品化试剂盒，产品操作手册上应标明预期精度。

阳性/阴性对照

· 每次测定至少需要一个阳性对照，以监测两次测量间的差异。

· 理论上，阳性对照值应在试剂盒的低~中滴度界值范围内，以获得推荐的精度值。

· 阳性对照值应在测定的线性范围内。

· 同样，每次测定均需一个阴性对照，阴性对照值应低于界值。

· 当阴性/阳性对照值落在设定范围外时，视本次测定无效。

单次/重复测定、界值计算

· 若单次测定能获得满意的精确度，无须做重复测定。

· 采用非参数百分比法确定界值。

· 鼓励厂商根据第95和99百分位来确定和报告界值。

· 临床实验室使用商业化试剂盒时须核对厂商提供的界值。

类风湿因子的干扰

· 在评价时，应注意类风湿因子可影响测试结果。

检测后

检测报告

· 结果应以单位或半定量范围进行报告，并标注阴性、“可疑”、中度阳性和高度阳性。

注释

· 强烈建议在报告检测结果时，列入有助于临床医师的注释。

· 生产商应公开源于临床研究的证据信息，这也许有助于结果的解释。

指南解读

北京大学第三医院风湿免疫科 金银姬 刘湘源

根据国际分类标准，APS的诊断要求检测aCL和抗β2GPI抗体。目前，aCL和抗β2GPI抗体检测结果的变异问题已经影响到其他自身免疫疾病的相关检测，其临床应用也受到限制。

目前，新检测平台的建立以及半自动或全自动分析仪器的出现，对检测技术标准化提出了新的挑战。采用酶联免疫吸附实验检测以上两种抗体，并不影响接受抗凝治疗患者的检测结果。因此，aCL和抗β2GPI抗体的检测对于APS的诊断和治疗仍然无法替代。

作为由抗磷脂抗体引起的自身免疫病，APS的诊断有赖于严格可靠的实验室检查。关于前述“aCL与抗β2GPI抗体的国际推荐共识指南”，现解读如下。

1.诊断APS应选择的实验项目

诊断APS的主要自身抗体包括用固相法[抗心磷脂抗体（ACL），抗β2糖蛋白