PCR法检测乙肝病毒(HBV)
多聚酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)是一种模拟天然DNA复制过程,在体外扩增特异性DNA(或RNA)片段的新技术。本实验是将待检双链DNA经94℃高温变性成单链作模板,然后加入一对人工合成的寡核苷酸引物,引物分别与待扩增DNA片段的两端互补,经55℃ 低温退火,引物与模板互补结合。在72℃条件下,结合于模板上的引物在DNA聚合酶的催化下,利用反应体系中的4种dNTP为原料,按碱基互补配对的方式延伸合成两条新的DNA链。所扩增的DNA可作为下一轮扩增反应的模板。重复上述循环过程,经过20~30个周期后,特异的目的DNA可扩增百万倍以上。 PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后即可观察到特异的扩增条带。
PCR方法操作简便,灵敏度高,可检测出少至0.1pg的目的DNA。目前已广泛应用于多种病原微生物的检测。
乙肝病毒(HBV)感染引起的乙型肝炎,在我国发病率很高,而且HBV与肝硬化、原发性肝癌关系密切,因此,HBV的诊断极为重要。PCR检测HBV-DNA敏感性明显高于传统的血清学方法,且能显示HBV在体内复制情况,直接反映患者血液的感染性,并对模棱两可的或与临床表现不符的血清学结果,PCR技术有助于明确诊断。
PCR方法操作简便,灵敏度高,可检测出少至0.1pg的目的DNA。目前已广泛应用于多种病原微生物的检测。
乙肝病毒(HBV)感染引起的乙型肝炎,在我国发病率很高,而且HBV与肝硬化、原发性肝癌关系密切,因此,HBV的诊断极为重要。PCR检测HBV-DNA敏感性明显高于传统的血清学方法,且能显示HBV在体内复制情况,直接反映患者血液的感染性,并对模棱两可的或与临床表现不符的血清学结果,PCR技术有助于明确诊断。
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