细胞外囊泡和聚糖：生物标志物研究的新途径

【摘要】生物标志物的研究在不断发展，从基础研究以及对不同蛋白质组、基因组和糖组的探索中,新的分子和分子集合体(如可溶性和颗粒性复合物)，已成为生物标志物。细胞外囊泡(EVs)和聚糖在自然界中无处不在，两者的组成和结构都反映了亲本细胞的生理状态，并在疾病状态下发生显著变化。EVs相关聚糖，单独或与相关生物体液中的可溶性聚糖结合作为分析物使用，旨在捕捉完整的复杂生物标志物图谱，使其能够在不同的临床环境中应用。将EVs和聚糖结合起来，将有助于从它们极端且独特的异质性中提取有意义的数据，用于实时诊断。EVs表面的聚糖可以标记其亚群，并建立糖基化特征、溶解特征和分子模式。这些均为探索复合生物标志物提供了新视角。

【关键词】生物标志物;细胞外囊泡;聚糖;前列腺小体

         本文概述了关于细胞外囊泡（EVs）和聚糖的特定领域，从理论框架和方法学角度，探讨二者在临床化学中的潜在应用。所有细胞可释放纳米级EVs，聚糖(复杂的碳水化合物）同样存在于所有细胞中。EVs和聚糖在结构、组成和功能方面表现出高度异质性。在发现之初，这两类均未被视为生物学中的重要角色，多年后才认识到它们在基本生理过程中的关键作用。如今，EVs被认为是细胞间通讯的新模式，而聚糖则是生物信息编码和存储的要素。因此，这两个领域的研究在“生物标志物”这一方向上产生了交叉。关于生物标志物的研究，通过液体活检获取EVs/EVs相关聚糖以及进行多组分分析的可行性尤为重要。然而，由于其固有的结构特性带来的限制，它们在临床上的转化仍处于起步阶段，有待开发适用于医学实验室的适配分析工具。本综述旨在对EV糖组学（EV-glycomics）和生物标志物发现中的挑战进行广泛讨论，强调基础科学研究人员、医学生物化学家、临床医生和生物技术公司需要协同行动，以推动医疗健康领域的创新。

一、细胞外囊泡（EVs）

         1. 作为异质性颗粒分析物的EVs：生物体液含有纳米级颗粒，这些颗粒具有相似的生物物理特性和生物化学组成，但作为医学生物化学中的分析物承载着独特的临床相关数据。脂蛋白作为众所周知的生物标志物，是由脂质和蛋白质组成的复杂异质性颗粒。它们的组成在其类别内各不相同，高密度脂蛋白（HDL）异质性很强，而极低密度脂蛋白（VLDL）和低密度脂蛋白（LDL）则呈现“粒径逐渐减小、密度逐渐增加”的连续颗粒群。与脂蛋白不同具有单一的两亲性磷脂（含有胆固醇和载脂蛋白）外层和非极性脂质核心的非囊泡结构]，人体内含有称为EVs的结构，具有磷脂双分子层（含蛋白质、糖蛋白）和水性核心。在由不同细胞和组织分泌物组成的生物液体中，EVs具有高度异质性且来源多样。其主要类别（在脂蛋白大小分布上存在重叠）包括：外泌体（50-150nm）、微囊泡（100nm-1μm）和凋亡小体（50nm-5μm）。不同类别的EVs具有不同的生物发生途径：质膜出泡（凋亡小体）、质膜出芽（微囊泡）以及多泡体胞吐作用，即经典的内体途径（外泌体）。越来越多的的实验证据表明，它们充当了从起源细胞/组织携带不同分子[蛋白质、脂质、脱氧核糖核酸（DNA）、核糖核酸(RNA）]的天然载体。通过这种方式，它们反映了亲本细胞的生理和病理状态，此外，EVs易于从血液和尿液中获得，是实验室检测的便捷样本。所有这些使其成为诊断领域的“新星”，并被认为是下一代高特异性、高灵敏度的生物标志物。有观点认为，未来EVs对生物技术的影响可能媲美抗体。

         2. EVs的生物发生：EVs的生物发生尚未完全明了，不同类型的生成途径存在差异：（1）微囊泡(MVs）：是通过质膜直接向外出芽形成的，它们的生物发生基于质膜磷脂重分布和肌动球蛋白收缩机制的协同作用。成熟的MVs经过严格调控的掐断一断裂过程后，直接释放到细胞外环境，小GTP水解酶（GTPases）是不同MVs调控通路的常见组分。（2）凋亡小体：是在细胞凋亡晚期细胞碎裂时释放的，凋亡小体的形成包括：细胞表面的膜起泡、膜突起形成和囊泡形成，这些过程受不同的分子调控，包括：Rho相关蛋白激酶1（R0CK1）、肌球蛋白轻链激酶和肌动球蛋白。（3）外泌体的生物发生始于质膜发生内吞，形成早期内体，早期内体通过膜内陷产生小囊泡，形成包含多个内泡的晚期内体，称为多泡体(MVB)。它富含腔内囊泡(ILVs)，可捕获部分来自反式高尔基体网络和细胞质的潜在外泌体“货物”（cargoes，装载物）。MVB与质膜融合，ILVs作为外泌体被分泌出来。多种机制在外泌体生物发生中发挥作用。这些包括转运所需的ESCRT机制、SNARE蛋白及参与其分泌的RabGTPases，但四跨膜蛋白（TS）和脂质的重要性也不容忽视。TS协调货物的分选、膜组织和囊泡出芽，而脂质则影响膜曲率并提供独特的脂质组成。还有其他参数用于EVs的分类(表1)，学界目前的建议是，除非通过实验确认了EVs的生物发生途径，否则应使用EVs作为统称。

         总的来说，EVs包含一系列具有不同粒径和特性的囊泡群。对于来自生物体液（包含不同细胞/组织分泌组）的EVs，这种情况甚至更加复杂。TS是整合膜蛋白，被认为是经典的囊泡标志物，但其分布模式对不同EVs群体具有特异性。从不同来源获得的EVs实验数据表明，多种因素导致了它们的生物物理和分子异质性。因此，存在不同的EVs亚群，它们在超微结构、膜和货物组成方面存在差异。EVs的粒径分布也被认为是潜在的参考价值指标。尽管分离方案会影响EVs的形状，但存在固有的异质性也会增加复杂性「如单层膜/双层膜、膜包被、丝状结构、电子致密区、囊泡内囊泡、管状结构（椭圆形、小和大）]。通过梯度超速离心分离的低密度和高密度EVs代表两个不同的亚群，两者在RNA、脂质和蛋白质组成方面进一步存在差异，这可能是由于不同的生物发生和货物机制所致。高密度EVs粒径较小并与核糖体蛋白相关，而低密度EVs则与线粒体蛋白相关。EVs亚群也可以根据特定分子的存在来划分，例如经典的外泌体标志物[四跨膜蛋白CD63、CD81、CD9，肿瘤易感基因101（TSG101），凋亡相关基因2相互作用蛋白X（Alix）]或其他特定蛋白质（MHCⅡ类分子、HSP70、Flotilin-1）以及RNA(miRNAs、IncRNAs、circRNAs、snoRNAs、snRNAs、tRNAs、rRNAs和piRNAs）和DNA（单链、双链、基因组或线粒体）货物。与EVs功能相关的差异[可能与其来源（器官/细胞）以及随后的组成/货物相关]也被视为异质性的来源。

         3. EVs在液体活检中的应用：它与传统活检(通过手术或穿刺取样)不同，液体活检是一种基于采集生物体液（血液、尿液、脑脊液、泪液和乳汁)的微创技术。液体活检样本中包含来自不同组织的多种产物，且可随时间重复采样，使临床医生能够克服传统实体活检的局限性。通过分析细胞和非细胞(脂质、代谢物、蛋白质/糖蛋白等)液体活检分析物，立组织与生物体液(主要为最常用于实验室分析的外周血)之间的关联。非细胞性分析物中，EVs近年来备受关注——其分析价值被认为优于其他分析物。外周血是EVs的便捷来源，其数量估计为1011颗粒/mL血液。其他生物体液也是EVs的丰富来源，但由于检测方法的局限性(检测任何颗粒，非特指EVs)的原因，EVs浓度的估算容易出错。此外，它们在生物学上稳定性高，循环中半衰期长。作为分泌组的一部分，它们可以监测亲本细胞在病理和生理过程中的变化。EVs本身可视为生物标志物(根据数量和粒径），此外，它们代表了已知/特异性生物标志物的来源。综上所述，它们既适用于单一分析，也适用于多重分析。EVs样本的纯度是其用于液体活检诊断的关键，然而，标准化EVs样本存在许多障碍，尚无完美的分离方法。最常用的是差速离心和超速离心/密度梯度离心以及尺寸排阻色谱(SEC)(见表2)。方法的选择建议取决于目的/分析物特性。为减少污染，通常建议联合使用多种方法。

         分离物中的EVs可以使用透射或扫描电子显微镜进行监测和表征。此外，估计相应分离物中EVs的数量和粒径是标准程序的一部分，常采用纳米颗粒追踪分析（NTA）或动态光散射（DLS）。针对EVs特异性标志物/生物标志物的抗体也可用于不同的实验形式，如蛋白质印迹、流式细胞术等。分析前程序对EVs分离影响差异较大（见表3），没有简单的解决方案，但给出了一些通用原则。

         不同生物体液中存在的污染物会不同程度地与EVs一起被分离出来，可能需要采取特定的预防措施将EVs与这些组分分开。关于样本处理，血清受抗凝剂的影响比血浆小，与酸性枸橼酸葡萄糖（ACD）和乙二胺四乙酸（EDTA）血浆样本相比，血清和枸橼酸血浆中含有更多血小板来源的EVs。由于样本运输、从采集到分离的时间以及离心方案的影响，去除血小板也非常重要。优选方案是立即离心样本（在采集现场）或在离心前等待24h，以避免小EVs随细胞一起被去除。储存期间，EVs可能因粘附在储存容器表面而丢失，推荐使用等渗缓冲液储存EVs（以防止储存、冷冻和解冻过程中的pH值变化）。应避免反复冻融循环以防止EVs聚集。尽管储存温度和冻融循环不那么重要，但不应将来自冷冻生物样本库的数据与新鲜样本的数据进行比较。

         4. 作为体外诊断工具的EVs：尽管EVs作为分析物的研究较多，但由于检测性能方面的技术瓶颈（由于缺乏标准化导致可重复性低），其在临床应用中的进展和批准受限。血液中EVs的分析可以涵盖来自正常细胞、肿瘤基质或肿瘤细胞。对单个EV，可同时分析RNA、DNA和蛋白质。EVs包含不同类型的RNA：miRNA、IncRNAs、circRNAs、snoRNAs、snRNAs、tRNAs、rRNAs、piRNAs。关于EV相关的DNA，可能携带不同的突变，但通常代表完整的基因组，不像循环肿瘤DNA(ctDNA)中常见的那样片段化。目前，在临床诊断、预后或治疗监测方面，尤其是癌症中（乳腺癌、肺癌、肝细胞癌、卵巢癌、膀胱癌、结直肠癌、前列腺癌、黑色素瘤），对EVsRNAs（miRNA，IncRNA，mRNA）的研究远多于DNA（突变）或蛋白质。利用EVs的结构/功能，它们在多组分诊断中的应用受到越来越多的关注。与当前方法相比，研究人员旨在结合高通量分析与深度学习解读，提升单一检测的适用性。

         近期有综述对涉及EVs相关服务和产品的公司进行了回顾，尽管EVs诊断产品的制造仍处于早期发展阶段，但已取得显著进展。ExosomeDiagnostics已成功生产出商业化的ExoDx检测，于2019年获得FDA突破性医疗设备认定，这种基于尿液EVs的检测有助于避免对前列腺特异性抗原（PSA）浓度处于灰区(怀疑患有前列腺癌)的老年患者进行不必要的活检；miRScientific推出的商业化miRSentinel检测于2020年获得FDA突破性医疗设备认定，该检测基于尿液EVs来源的sncRNA进行前列腺癌检测；还有，研究人员还开发了一种基于唾液的EVs miRNA生物标志物miR-185，用于口腔癌的诊断和治疗。此外，还有许多公司和学术机构一直积极参与使用不同技术方法评估EVs生物标志物，例如，Exosome Plus（韩国）推出了专注于EVs治疗的ExoThera平台，并计划开发针对11种主要癌症类型的液体活检平台；MercyBioanalytics（美国）开发了用于卵巢癌和肺癌早期检测的Halo检测；Craif（日本）开发了使用微流控纳米线装置和纤维素纳米纤维提取EVs的独特方法。目前，前沿分析和检测系统致力于解决EVs相关microRNA和其他痕量核酸分析的难题。在EVs诊断的临床试验领域，许多已完成和正在进行的研究都聚焦于各种疾病状况，包括癌症、神经系统疾病以及呼吸和心脏功能障碍，样本主要使用来自血液/血浆或尿液的EVs。

二、聚糖

         1. 糖生物学基本概念: 聚糖是能与蛋白质或脂质共价连接形成糖蛋白/蛋白聚糖和糖脂的复杂碳水化合物。最近的研究表明，聚糖也可以与小非编码RNA结合。有几类聚糖:糖蛋白/蛋白聚糖、糖鞘脂、糖胺聚糖和游离寡糖。蛋白质糖基化是一种共翻译和翻译后修饰过程。N-糖基化始于内质网(ER)，并在高尔基体中继续进行；而0-糖基化主要发生在高尔基体中。因此，糖基化步骤构成了细胞分泌机制的一个组成部分，与蛋白质和核酸不同，聚糖的合成无需模板，其最终结构具有非唯一性。除了常见的N-糖基化[连接到特定氨基酸序列基序中天冬酰胺的氮原子上(Asn-X-丝氨酸(Ser)/苏氨酸(Thr)，其中“X”是除脯氨酸(Pro—外的任何氨基酸]和0-糖基化(连接到Ser或Thr)外，还有P-糖基化(通过磷酸二酯键连接到Ser或Thr)、S-糖基化(连接到半胱氨酸）、C-糖基化(碳水化合物异头碳上的碳一碳键)和糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定。

         N-聚糖共享一个共同的核心序列[两个N-乙酰葡糖胺（GIcNAc）残基和三个甘露糖（Man）残基]，并分为三种类型：高甘露糖型（仅有Man残基延伸核心）、复合型（由GIcNAc启动的“天线”延伸核心）和杂合型（Man延伸核心的Manα1-6臂，—个或两个由GIcNAc启动的天线延伸Manα1-3臂）。至于0-聚糖，连接到Ser/Thr的最常见糖是N-乙酰半乳糖胺(GalNAc）和GIcNAc，GalNAc是0-GalNAc聚糖的起始糖，通常延伸形成四种常见核心结构之一，随后可进一步延伸形成成熟的线性或分支0-GalNAc聚糖。GIcNAc连接Ser或Thr通常不在高尔基体发生且不进一步延伸，这种0-聚糖特异性地存在于细胞核、线粒体和细胞质糖蛋白上。异质性的其他来源，包括：单糖序列的变化（最常见的是吡喃己糖、6-脱氧己糖、乙酰氨基糖、唾液酸）、碳水化合物异构体和修饰形式，以及寡糖链的分支模式。

         单个糖蛋白可以同时具有N-和0-聚糖，也可以具有多个N-或0-连接的聚糖。微异质性(分子间的变异，通常在寡糖链的末端位置）是糖蛋白固有的，这导致同一分子存在不同的糖型。已知这些糖型的组成在正常生理和病理条件下会发生变化，进而影响分子稳定性、抗原性和结合特性，并改变其细胞内运输、分泌以及生物学功能，它可能间接反映糖基化酶活性以及在不同糖蛋白加工阶段相关底物可用性的变化。糖蛋白作为分析物具有异质性，且目前尚无糖蛋白生物标志物的参考物质，这源于其结构特性，因为它们可以以不同的剪接变体、亚型、降解产物、寡聚物或与各种配体形成复合物的形式存在。所有这些都可能影响实验室检测的标准化、可比性和分析性能。血清蛋白大多经过糖基化，被视为易于获得的生物标志物，但临床实验室分析很少包括对血清蛋白糖型的分析。

         2.聚糖分析：糖组（某一生物或细胞的全部聚糖）被认为是生物标志物的丰富来源。糖组学(Glycomics)旨在定义在特定时间、位置和环境条件下细胞或生物体产生聚糖的完整谱系。糖蛋白组学(Glycoproteomics）旨在确定细胞蛋白质组上的糖组。目前，已开发多种分析技术、仪器和生物信息学工具用于糖组分析。高通量糖组学依赖于不同的技术，如：液相色谱（LC）、毛细管电泳（CE）、质谱(MS）和凝集素芯片。根据需要解析的复杂程度，可以进行糖谱分析、聚糖类别表征和完整结构分析。糖谱分析作为起点，代表从载体上释放的混合聚糖的一维分离，并提供聚糖结构的基本概述；类别表征意味着将聚糖混合物分离成不同的聚糖类型，并可提供不同聚糖类别的相对定量；完整结构分析，确定聚糖的单糖序列和修饰形式、异头性和连接方式。糖组学分析可以描述聚糖结构以及相关的定量信息，基于聚糖组成的生物标志物可用于疾病检测。此外，发现与在特定地点/时间表达的单个蛋白质和脂质相关的特定聚糖（异构体分离、蛋白质特异性和位点特异性糖基化）可能会提升特定生物标志物的临床效用（提示组织来源和疾病进展/严重程度）。总的来说，研究表明糖基化特征可以作为识别疾病特异性聚糖特征和开发特定诊断测试的基础。因此，精确测定位点特异性聚糖结构的相对丰度是识别聚糖生物标志物的关键，开发适当的分析工具，预计不仅可用于早期疾病诊断，还可作为疾病表型的辅助参数。

三、生物标志物

         1. 作为生物标志物的细胞外囊泡聚糖：糖蛋白和糖脂存在于质膜外表面，可作为可溶性分子存在于血清和其他生物体液中，或不溶性分子存在于细胞外基质或存在于EVs在内的细胞外颗粒。糖蛋白可以是EVs膜的组成部分，或通过不同配体作为EVs膜相关分子存在，两者共同构成EVs的冠结构，类似于细胞的糖萼。作为细胞表面分子条形码的聚糖，也可以被认为是区分具有相似生物物理特性的EVs的可能因素。研究EVs聚糖和研究聚糖本身的方法是类似的(图1)。一项关于T细胞来源EVs的糖组学(使用凝集素芯片)的开创性研究，揭示了其表面富集(与来源细胞相比)了多聚乳糖胺和α2-6连接的唾液酸残基、复合型N-聚糖和高甘露糖结构。还发现这种聚糖特征在各种细胞来源中都是保守的。对EVs聚糖组成的分析表明，在各种疾病状态(前列腺癌、卵巢癌、结直肠癌、肺癌、半乳糖血症、常染色体显性多囊肾病等)中糖组的变化，这提示了EVs聚糖作为生物标志物的潜力。作为EVs病理生物学研究最广泛的癌症领域，积累的实验证据显示，据揭示了末端唾液酸化增加、N-聚糖核心岩藻糖基化、N-聚糖分支、截短0-聚糖以及0-GIcNAc糖基化增加。

         总的来说，糖蛋白的分布由其结构决定，也取决于负责其运输或其结合伴侣的分子的表达和可用性。基于此，寻找生物标志物的新方法聚焦于糖蛋白的结合特性，将其作为异质性分析物的被忽视的决定因素。它们可以作为设计新型分析方法的靶标，旨在建立糖基化特征、溶解特征和分子模式作为可能的EVs相关生物标志物（见表4）。另一方面，糖蛋白的结合特性可能与其他临床目的相关，因为聚糖介导的相互作用有助于EVs的功能特性。

         2. 前列腺小体（人精浆EVs）的糖基化特征：人精浆(hSP)是由男性附属性腺和附睾产生的复合液体，富含EVs，其中最多的是由前列腺上皮细胞产生的前列腺小体(prostasomes)。它们在粒径、内部形态和分子组成方面表现出高度异质性，其生物发生机制与外泌体一致。前列腺小体在粒径(50-200nm)、形状(细长、圆形、梨形)、突起的有无以及密度(深色和浅色囊泡)方面存在差异。前列腺小体膜富含多种生物活性分子(酶、受体、细胞因子)，使其区别于其他来源EVs的特性是其独特的脂质组成和结构——高浓度的胆固醇和鞘磷脂，形成脂筏。前列腺小体具有双向功能，既有利于正常的生殖过程，也促进恶性前列腺增殖。研究认为，前列腺小体促进生育能力的能力（增加精子活力、免疫抑制特性）也可能促进前列腺癌细胞的存活和进展[通过磷酸化酶和金属酶、血管紧张素转换酶(ACE)、组织因子和嗜铬粒蛋白A介导]。前列腺小体根据所谓的“前列腺小体特征”来定义，即三条90-150kDa的蛋白质条带，被鉴定为氨肽酶N(CD13)、二肽基肽酶IV(CD26)和脑啡肽酶/中性内肽酶(CD10)。研究人员通过凝集素亲和方法的实验结果表征前列腺小体表面特征。聚糖在组织复合体中的密度、性质和募集模式，特别是TS网络(一个由四跨膜蛋白及其伴侣蛋白组成的网络，促进细胞相互作用)或半乳糖凝集素一糖蛋白晶格，影响了潜在凝集素配体的呈现和可及性。凝集素反应性与选定的TS、经典EVs标志物相关联，可进一步明确前列腺体异质性，并指出不同囊泡群体的离散差异。根据小麦胚芽凝集素(WGA)和刀豆球蛋白A(Con A)凝集素的结合推断，唾液酸化聚糖和甘露糖基化聚糖都标记了前列腺小体群体，这些群体在膜相关酶，如γ-谷氨酰转移酶(GGT)和碱性磷酸酶(ALP)的活性方面存在进一步差异。唾液酸化和甘露糖基化聚糖以及TS:CD63、CD9和CD81在去污剂敏感/抗性膜域上的分子分布可作为比较分析的参考指标，结果表明，CD9、半乳糖凝集素-3(gal-3)和WGA反应性聚糖分布在去污剂抗性域，而CD63、GGT和Con A反应性聚糖则位于去污剂敏感域。总的来说，这些研究共同识别出完整和溶解的前列腺体中存在4-6种不同的糖基化特征。在比较正常精子和少精个体的前列腺小体时，发现这些群体在相关的ALP活性以及完整EVs膜蛋白的分布方面存在细微差异。

         3. hSP EVs与可溶性亚蛋白组中的聚糖相关模式：从EVs作为不同生物标志物载体的角度来看，其研究有重要意义。这导致了不同生物体液高分子量组分中出现独特的低分子量生物标志物。鉴于此，理解跨膜/膜结合蛋白分子模式的分析价值和生物标志物潜力可能具有特殊意义。因此，根据释放模式的不同，亲水性物质（无膜结构域）或疏水性物质（倾向于自聚集或与脂质部分形成复合物）可能以高分子量形式存在于特定生物体液的可溶性亚蛋白组中，也可能存在于EVs膜本身整合膜蛋白组分。其中一个作为生物标志物引起关注的蛋白质是GGT，几乎在所有细胞中都有表达。它是一种膜结合酶，是胃肠道疾病的标志物，广泛用于临床化学检测，它也被认为是EVs的标志物。GGT有四种分子量不同的组分：游离型GGT（f-GGT，70kDa）、小型GGT（s-GGT，250kDa）、中型GGT（m-GGT，1000kDa）和大型GGT（b-GGT，2000kDa）。m-GGT、s-GGT和f-GGT的生物发生及物理和分子特性尚未完全明了，推测认为它们可能来源于b-GGT的渐进修饰（蛋白质切割）。

         血清中GGT浓度升高见于多种病理状态。最近的研究提出了不同GGT形式的存在对其生物标志物潜力的重要性，即在正常与病理条件下特定组分（通常是b-GGT和s-GGT）比例的变化。此外，b-GGT被认为具有异质性，可能包含不同的颗粒/膜结构或大分子蛋白质复合物。基于强调b-GGT异质性及其在hSP（也是前列腺小体的丰富来源）中浓度极高的数据，研究人员对GGT的异质性进行了新的研究。将含有GGT的分子模式进行了糖生化表征，将其作为提高其临床效用的可能靶点。分子模式定性描述了一系列蛋白质和糖蛋白，其中一些始终存在，而另一些的存在可能在样本间存在差异。总体而言，WGA反应性唾液酸化粘蛋白样聚糖与hSP可溶性亚蛋白质组中的GGT相关，而Con A反应性甘露糖化聚糖则是前列腺小体亚蛋白质组的特征标志，所得结果揭示了b-GGT与EVs/可溶性聚糖的存在及分布的见解，二者共同构成了潜在的复合生物标志物。

四、结论

         涉及EVs和聚糖的基础研究成果为其在生物医学领域中的多重应用开辟了道路。生物技术公司已开发出多种利用EVs的内容物作为生物标志物的体外解决方案，。考虑到疾病的复杂性，可以预期EVs和聚糖，即EVs聚糖分析，将成为临床检验医学的一个重要组成部分。目前，在开发更标准化的纯化和分析程序以及解读方案方面，挑战仍然存在。

编译节选自：Biochem Med (Zagreb). 2024 Jun 15;34(2):020503.