早期妊娠21三体综合征母体血清中假定蛋白质生物标志物候选的质谱探索和选择反应监测（SRM）

21三体综合征的确诊需要冒流产的风险进行侵入性治疗。现行最先进的母体血清筛选试验测量各种组合的PAPP-A（妊娠相关蛋白A），游离hCG-β，AFP（甲胎蛋白）和uE3水平，最大灵敏度为60-75% 和假阳性率为5%。目前尚未满足最好可以在早期妊娠内检测出危险怀孕的高选择性非侵入性筛选试验的需要。本研究的目的是运用蛋白质组学和质谱分析法加上定量选择反应监测（SRM）法探索早期妊娠母体血清21三体的新假定生物标志物。这一新颖工作流程的结果包括两方面：

（1）我们确定了21三体对正常样本的差异表达蛋白一览表，包括PAPP-A，以及（2）我们为确认探索实验识别的12种新假定标志物研发了一种多路复用、高通量SRM试验。为了缩小从探索实验获得的差异表达候选物的初始大列表，我们在数据分析过程早期融入了接收器工作特性（ROC）曲线算法。我们认为这种方法在筛选从探索实验获得的广泛和复杂数据时有很大优势。工作流程有效开采来源于高分辨率LC-MS/MS（液相色谱/串联质谱法）探索数据的信息用于对未分馏血清消化物进行无缝结构的快速、目标试验。消化血清基质背景中目标肽类的SRM试验检测下限（LLOD）大约为250-500 柱上amol而准确定量限（LOQ）约为1-5柱上fmol。在LOQ及以上通过变异系数确定的试验误差范围是0-16%。本研究建立的工作流程缩小了蛋白质组学生物标志物探索和转化成一种临床研究环境之间的差距。明确地说，对于21三体，所述多路复用SRM试验为更大样本群的这些和潜在其他缩氨酸候选物的高通量验证提供了一个工具。

引 言

在全世界大部分发达国家中35岁以上的女性约占怀孕人数的15%。在胚胎发育时患多种染色体缺陷的风险随着母亲年龄的增加而增加。唐氏综合征（DS）在600-800例怀孕事件中的发生率为1并提示多数涉及侵入性治疗比如羊膜穿刺术或绒毛膜取样的产前诊断。这些治疗有流产的风险，因此只用于高危女性。在过去几年中，一直努力发展可以辨识早期妊娠非整倍体、侵入性较小的筛查方法。测量与DS有关的血清蛋白标志物比如游离hCG-β、PAPP-A、甲胎蛋白和抑制素A的母体血液试验，加上颈项透明层检查，对早期妊娠筛检的可接受性已获得提高但是这些标志物的敏感性和特异性仍可以改进。以前的蛋白质组学研究确定了多种其他假定血清标志物。在最新研究中，作者运用了高丰度蛋白质免疫耗竭与采用同重元素标记（iTRAQ）技术的定量质谱分析相结合。免疫耗竭用于减小血浆蛋白质的动态范围，希望能发现低丰度假定标志物。 虽然样本量小（6个21三体样本和6个正常妊娠样本），但是本研究确定了DS中与整倍体血浆样本相对的200多种浓度改变的蛋白质。尽管经过免疫耗竭，许多差异表达蛋白仍是相对高丰度蛋白质包括几种载脂蛋白、转铁蛋白和补充成分蛋白。在这些研究中发现的假定生物标志物有些重叠但是相对来说在横跨所使用不同技术包括2-D DIGE，MALDI质谱分析法和鸟枪法蛋白质组学的表达率上几乎没有一致性。在一定程度，这种差异可能由于所有这些技术除了iTRAQ并不是真正定量的。另外，其中一些研究包括中期妊娠和早期妊娠样本，而蛋白质相对丰度在这两个阶段可能有所变化。这些蛋白质组学研究的结果突出了DS的复杂性和找出具有必要特异性的新标志物的挑战，但是未满足的需要仍很紧急。在本研究中，我们着手缩小生物标志物探索和查证之间的差距。我们的目标是扩充以前的探索