围产期B族链球菌检测方法的临床应用与诊疗价值
林杨，副教授、副主任医师、博士研究生导师、医学博士、吉林大学第二医院妇产科副主任。主要擅长领域：妇产科常见疾病的诊疗，阴道镜下早期发现诊断宫颈与下生殖道阴道癌前病变，HPV感染相关疾病的基础与临床研究。学术任职：中国医药教育协会妇科专业委员会宫颈病变分会常委、中国宫颈疾病与宫颈癌防治专业委员会委员、中国优生科学协会阴道镜和宫颈病理学协会（CSCCP）委员、吉林省妇产科质控中心副主任委员、吉林省妇科肿瘤专业委员会常委。科研方面：参与国家级及省级项目20余项，作为负责人主持国自然青年项目、省级项目8项；发表文章40余篇，作为第一作者/通讯作者发表SCI文章13篇。参与编写论著8部。
褚雨晴，吉林大学第二医院妇产科学在读硕士研究生，师从林杨教授。研究方向：阴道镜下早期发现诊断宫颈与下生殖道阴道癌前病变，HPV感染相关疾病的基础与临床研究。
【摘要】B族链球菌（GBS）是导致围产期母胎感染的重要条件致病菌，它与晚期流产、早产、胎膜早破、围产期感染、新生儿感染等不良妊娠结局密切相关。近年来国内各种研究不断优化围产期GBS检测方法。选择使用适宜的围产期GBS检测方法，这对于预防孕产妇和新生儿感染、减少不良妊娠结局有着重要意义。
【关键词】链球菌感染；围产期；临床实验室技术；微生物学技术；免疫测定
B族链球菌（group B Streptococcus，GBS）又称为无乳链球菌（Streptococcus agalactiae），是一种兼性厌氧的革兰氏阳性球菌，主要定植于人体的消化道及泌尿生殖道，是导致围产期母胎感染的主要条件致病菌之一。GBS感染与晚期流产、胎膜早破、围产期感染、新生儿感染等不良妊娠结局有关[1]。根据研究表明，约50%GBS定植的孕妇会将GBS传播给新生儿[2]，若产时未预防性使用抗生素，约1.1%的新生儿会出现新生儿早发型GBS病（GBS early-onset disease，GBS-EOD），主要表现为菌血症、脑膜炎、肺炎或器官组织软组织感染等[3]。临床中应重视GBS的危害，选择适宜的围产期GBS检测方法，对围产期孕妇进行GBS感染的普遍性检测，对可能出现的GBS母婴感染进行及时的预防性治疗，以降低围产期孕妇感染和不良妊娠结局的发生。
一、围产期孕妇B族链球菌的检测意义
GBS是导致围产期孕妇感染的主要条件致病菌之一，孕妇体内定植感染的GBS在一定条件下可转变为致病菌，导致孕产妇或新生儿患侵袭性GBS病。GBS可通过产道上行扩散感染至子宫和胎膜，可能导致孕妇发生晚期流产、早产、胎膜早破，也可能导致孕妇出现无症状细菌尿、膀胱炎、肾盂肾炎、菌血症、羊膜腔感染、产后子宫内膜炎及产后脓毒血症等情况，甚至出现胎死宫内[4]。在围产期和分娩期GBS感染新生儿，可能导致新生儿出现败血症和中枢神经系统感染，严重者可能出现死亡，而存活者可因炎症损伤导致神经系统后遗症。根据新生儿感染GBS时间可分为新生儿早发型GBS病（GBS early-onset disease，GBS-EOD）和新生儿晚发型GBS病（GBS late-onset disease，GBS-LOD）。GBS-EOD是指发生在分娩后7天内，主要发生于产后12~48小时，主要表现为新生儿菌血症、肺炎或脑膜炎，致病的GBS来源于母体的垂直传播[5]。GBS-LOD是指发生于产后7天至3个月，发生率为0.032%，主要表现为新生儿或婴儿菌血症、脑膜炎、肺炎或器官软组织感染，致病的GBS来源于母体水平传播、院内感染或社区感染[6]。有研究表明，普遍性筛查后采取预防性治疗，较基于危险因素的预防性治疗更能预防GBS-EOD的发生[7]。因此，应重视并推广、普及围产期GBS的筛查，并进一步研究采用更快速、便捷、低成本且具有较高敏感性、特异性的围产期GBS检测方法，对于可能出现的GBS母婴感染进行及时的预防性治疗，尽可能的减少不良妊娠结局的发生、降低GBS-EOD的发生率。
二、国内外GBS预防指南简介
美国疾病预防控制中心分别于1996年、2002年和2010年发布并修订GBS防治指南，最新指南建议，对于所有妊娠35~37周的围产期孕妇分别采集阴道下1/3和直肠拭子进行细菌培养，培养结果为阳性的孕妇即存在GBS定植，应给予GBS预防性治疗（IAP）[8]。
中华医学会妇产科学分会于2011年颁布的孕前和孕期保健指南将GBS列为妊娠33~36周产前检查备查项目[9]。2021年中华医学会围产医学分会及中华医学会妇产科分会产科学组共同制定的《预防围产期B族链球菌病的专家共识》中，推荐所有妊娠35~37周的围产期孕妇进行GBS筛查，孕期患GBS菌尿者或既往有新生儿GBS病史者可直接按GBS阳性处理。GBS筛查有效期为5周，若GBS阴性者超过5周未分娩，建议重复筛查[10]。
三、GBS实验室检测方法
1. 微生物学检测方法：微生物学检测方法主要包括普通培养法和显色培养法，是实验室检测GBS的经典常规方法。普通培养法是指直接将标本接种于血琼脂平板，37℃培养18~24小时后进行分离鉴定[11]，该种方法是明确GBS感染的金标准，但其耗时较长、操作过程复杂，并且孕妇生殖道中存在多种细菌，会影响最终GBS检测结果的判断；也可将标本接种于添加不同抗生素的选择性增菌肉汤后进行分离鉴定[12]，该种方法可有效抑制非目标菌生长，但增菌后培养明显增加了检测时间，并对培养基的要求较高，因此临床使用受到限制。
显色培养法是指在普通培养基中添加不同色素及混合抗生素，使得GBS生长产生特异性特征。但有研究表明，该种方法的敏感度低于普通培养基，这可能与混合抗生素抑制杂菌的同时也抑制了GBS生长有关[13]。
2. 免疫学检测方法：免疫学检测方法是采用特异性抗体检测抗原，常用的检测GBS的免疫学方法包括乳胶凝集试验（latex agglutination test，LA）、协同凝集试验（coagglutination test，COA）、对流免疫电泳试验（counter immunoelectrophoresis test，CIE）、酶联免疫试验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）等。该种方法快速、便捷，但对于GBS菌量要求较高，因此可与增菌肉汤联合使用[14]。但缺点在于免疫学检测方法假阳性、假阴性率较高。
四、分子生物学检测方法
分子生物学检测方法主要包括荧光原位杂交技术检测、实时荧光PCR技术、多重荧光定量PCR技术、环介导等温扩增技术等。具有快速、准确、敏感度高等特点，是目前已知检测方法中的最佳方法，但其不足之处在于对检测人员及设备的要求较高，费用相对昂贵，且无法获得药敏结果。
荧光原位杂交技术检测，是指使用荧光素直接或间接标记的核酸探针与待测样本中的核酸序列按照碱基互补配对的原则进行杂交，经洗涤后在荧光显微镜下进行观察、检测，该种方法可快速检测孕产妇阴道分泌物中的GBS[15-16]。
实时荧光PCR技术，是以GBS特异性蛋白C5a肽酶、CAMP因子、Sip表面免疫蛋白等基因为目标基因，使用荧光定量PCR技术扩增，用荧光的强度检测产物的数量，进而进行GBS检测[17-18]。
多重荧光定量PCR技术，是通过以检测GBS的荚膜多糖CPS基因为靶基因而建立的检测方法，可检测已知的多种GBS荚膜多糖[19]，因此该种方法在避免血清学检测中的交叉反应同时，还可鉴定GBS的血清型。
环介导等温扩增技术（loop-mediated isothermal amplification，LAMP）是2000年由日本研究人员Notomi等发明的一种等温条件下的扩增核酸技术，根据B族链球菌scpA基因的6个特殊区域设计了4条特异性引物，利用具有链置换活性的DNA聚合酶，在等温条件下进行链置换扩增反应，从而使靶基因高效扩增[20]。该种技术具有高效且特异性高的特点。
五、分析与展望
国内GBS实验室检测方法尚不统一，热点已逐渐从传统的培养法向免疫学、分子生物学等快速检测的方法转移，分子生物学的检测方法灵敏性与特异性不断提高，但对于检测人员及设备的要求也随之增加，在临床上大规模推广使用具有一定难度。并且，临床中针对GBS检测阳性的围产期妇女抗生素的选择，仍依赖于使用传统的细菌培养方法进行药敏试验。在实际临床应用中，面对各种不同情况，我们可根据各种检测方法的不同特点，选择性使用不同的围产期GBS检测方法。例如，单独使用分子生物学扩增技术检测GBS耗时短，可用于未行GBS筛查的孕妇产程中的即时检测，为GBS感染诊断与后续治疗提供一定依据[2]。
围产期孕妇感染GBS会导致胎膜早破、流产、新生儿感染等严重的不良妊娠结局。对于孕妇进行GBS筛查检测，围产期预防性使用抗生素，能够显著减少母婴侵袭性GBS病的发生，改善不良妊娠结局。美国等国家对于GBS筛查及防治策略比较完善，国内相关研究较为滞后。目前国内围产期GBS检测的实验室方法逐渐从传统的微生物学检测转变为免疫学、分子生物学检测。但各种方法均有所不足，仍需要进一步研究快速、准确、敏感且适用于大规模筛查的GBS围产期检测方法，为国内围产期GBS筛查及防治策略的制定提供基础。
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