外周血涂片白细胞聚集引起白细胞计数假性减少一例临床分析

EDTA-K2作为血细胞分析仪常用的抗凝剂，以其优越的抗凝效果和较低的细胞形态影响而受到广泛青睐。然而，随着临床应用的深入，EDTA-K2的局限性也逐渐显现，特别是其诱导的血小板和白细胞假性降低的问题，成为影响检验结果准确性的重要因素之一。有多篇文献报道[1-5]，EDTA-K2诱导血小板聚集导致血小板计数假性降低。相较于血小板聚集现象，关于EDTA-K2诱导的白细胞聚集引起的假性白细胞减少现象却少有报道，国内仅有个案报道[6-7]。现将本例外周血白细胞聚集引起白细胞计数假性减少报道如下。

一、病例资料

患者，男性，56岁，因咳嗽入院就诊，临床诊断为肺部感染，既往无特殊病史。临床要求完善血常规、凝血功能、肝功能、肾功能、电解质及肺炎支原体检查，其中凝血功能、肝功能、肾功能及电解质无明显异常，肺炎支原体lgM检测结果为阳性，而血常规提示WBC为2.88×109/L，RBC为2.46×1012/L，HGB为82g/L，PLT为120×109/L，中性粒细胞比例为90%，淋巴细胞比例为8%，仪器报警提示有幼稚粒细胞、贫血，触发了复检规则。于是推片染色镜检，镜下可见白细胞聚集成团，红细胞淡染区扩大，如图1。

图1. 白细胞聚集（10×100）

于是打电话给临床，建议重新采集3管血，第1管是无抗凝剂的采血管，第2管是含有EDTA-K2抗凝剂的血常规管，第3管是含有枸橼酸钠抗凝剂的血凝管。采血后分别将这3根采血管立即上机检测，然后将EDTA-K2管和枸橼酸钠管分别37℃水浴15min、37℃水浴30min、37℃水浴60min，然后上机检测，白细胞计数所得结果如表1所示。将37℃水浴60min后的EDTA-K2管颠倒混匀，然后推片染色镜检，镜下未见白细胞聚集，可见中性粒细胞均匀分布，如图2所示。

图2. 白细胞均匀分布（10×100）

由此可见，本例患者在无抗凝剂的情况下，其白细胞计数在正常范围内，而在有EDTA-K2抗凝剂的情况下，其白细胞计数减少。虽然枸橼酸钠抗凝剂与无抗凝剂结果相差不大，但是后续37℃水浴后白细胞计数逐渐升高，所以枸橼酸钠抗凝剂对白细胞计数也存在小程度的影响。本例患者阻抗法出现以中性粒细胞聚集为主的白细胞聚集现象，聚集在一起的白细胞经过检测小孔时，被当作一个大细胞计数，从而导致白细胞计数假性偏低。因此，本例患者可能因为EDTA抗凝剂影响导致白细胞聚集进而出现白细胞计数减少，37℃水浴60min后白细胞计数可恢复为正常。

二、讨论与分析

EDTA-K2作为血细胞计数的首选抗凝剂，因其对红细胞、白细胞形态影响小且能有效阻止血液凝固而被国际血液学标准化委员会（ICSH）推荐并广泛应用于全球[8]。然而国内已有个案报道[7]，多个原因可诱导白细胞聚集导致假性白细胞减少。EDTA-K2诱导的白细胞假性减少现象在临床上较为罕见，但一旦发生，可能导致患者被误诊为白细胞减少症，进而引发不必要的治疗干预或延误真正的疾病诊断。

鉴别EDTA-K2诱导的白细胞聚集现象与其他原因导致的白细胞减少是关键，其中最常见的是冷凝集和EDTA-K2诱导白细胞聚集导致白细胞假性减少。两者的鉴别在于EDTA-K2抗凝剂诱导的白细胞聚集，在镜下可见白细胞聚集成团，而红细胞散在分布且不聚集；冷凝集导致的白细胞聚集，不仅可以看到白细胞聚集，而且同时能看到红细胞聚集成团。这一特征有助于准确诊断EDTA-K2诱导的白细胞聚集现象。

白细胞聚集现象常见于成人，但有时也可见于儿童，目前关于白细胞聚集和疾病的相关性尚未完全明确，杨大千等[9]学者的研究指出，白细胞聚集可能与恶性肿瘤、感染、肝病及自身免疫性疾病有关。白志瑶等[10]报道3例EDTA-K2诱导的白细胞聚集均与肿瘤相关。至于EDTA-K2诱导白细胞假性减少的机制复杂，目前尚未完全明确，但可能与以下几个方面有关：1、患者体质与疾病因素：患者本身体质差异及某些疾病状态（如恶性肿瘤、感染、肝病、自身免疫性疾病）可能导致EDTA抗凝物质活化，激活白细胞表面隐匿性抗原，促进白细胞相互聚集。2、EDTA-K2与钙离子作用：EDTA-K2与血液中的钙离子结合形成螯合物，导致细胞内钙离子浓度变化，进而影响白细胞膜的稳定性，诱发白细胞聚集。3、温度与药物因素：低温条件及某些药物（如阳离子抗凝剂）可能通过影响白细胞间的电荷平衡，减少相互排斥力，从而促进白细胞聚集。

当发现EDTA-K2诱导白细胞聚集时我们可以尝试用以下方法进行纠正[11]：1、更换抗凝剂：采用枸橼酸钠或肝素钠等其他抗凝剂重新采血复查，以排除EDTA-K2的影响。2、37℃水浴处理：将EDTA抗凝的样本置于37℃水浴中温育一段时间后立即检测，可部分缓解或消除白细胞聚集现象。3、手工计数及分类：对于疑似EDTA-K2诱导的白细胞聚集样本，可采用手工计数及分类方法进行复核，确保结果的准确性。

综上所述，EDTA-K2作为血细胞计数的常用抗凝剂，虽然具有诸多优点，但在特定情况下可能诱导白细胞假性减少，影响检验结果的准确性。临床检验人员应充分了解其潜在风险，结合患者具体情况，采取合适的鉴别与纠正方法，以确保检验结果的准确性和可靠性，为临床诊断和治疗提供有力支持。

参考文献

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