与国际接轨•展国际前沿 ——国际动态回顾

中国检验界与国际检验界通过各种方式、各种渠道，如各种协会与学会、国外厂商进驻中国、中国民族企业走向国际等，联系与交流越来越密切。但由于各种因素，如交通、通讯、语言、文化等方面，我们无法实时掌握国际检验界的最新动态，因此《临床实验室》“国际动态”栏目为广大国内读者精选国际最新的检验原理、技术等学术文章，由专业人士翻译、编辑，由各领域专家校对，以期为读者准确的呈现其精髓与精华。

1,5-脱水山梨醇（1,5-AG）与高血糖症呈反比关系，也许可以作为短期（1-2周）高血糖症和血糖波动的指标，但是其预后价值不明。《1,5-脱水山梨醇与糖尿病和微血管疾病的关系》研究超过10000名社区动脉粥样硬化危险（ARIC）（基准，1990-1992）参与者的新鲜血液样品的1,5-AG，并且在随后近20年的诊治中描述了其与流行性视网膜病变，并发的慢性肾脏疾病以及并发的糖尿病之间单独的联系，研究力图评定1,5-AG与糖尿病风险和微血管疾病之间的关系。研究证明1,5-AG和糖尿病微血管预后有密切的联系并表明，1,5-AG对糖尿病患者具有预后价值，特别是HbA1c≥7%（≥53mmol/mol）的患者。未患糖尿病的患者，1,5-AG和糖尿病的发展以及糖尿病并发症之间的联系，经过调整后弱化。在鉴别早期高血糖症和未来的糖尿病方面，低浓度的1,5-AG灵敏度相当迟钝，但其在确定患有糖尿病的环境中有作用。在前提为患有糖尿病的环境中，低浓度的1,5-AG和微血管并发症有较强的相关性。并对1,5-AG可能能够作为一项有用的高血糖症的生物标志物提供了支持。但是，在糖尿病管理的环境中，1,5-AG的临床实用性尚需要全面的评估。

结肠直肠癌的筛查需要具有较高的诊断灵敏度与特异性的非侵入性检测。《便潜血检测阳性个体粪便标本中的KRAS基因突变和M2PK上调可筛查结肠直肠癌》研究年龄在53-75岁、具有CRC风险、免疫化学便潜血检测（iFOBT）为阳性的个体可提供粪便样本，在结肠镜检查前进行分子检测。使用内部实时ARMS PCR方法检测到KRAS密码子12 Gly→Asp、Gly、Val及密码子13 Gly→Cys发生基因突变，评估粪便样本中CRC基因与蛋白质标志物的测量，以期检测其临床效果。此研究中，测定粪便样本基因和酶标志物的预测性，适用于CRC检测。由于病人的年龄，研究中使用的实时PCR方法适用于iFOBT阳性、具有CRC风险的个体筛查。此外，通过使用分子和酶检测而不是iFOBT方法，减少假阳性结果在临床上具有显著效果。还需进行大量前瞻性研究来评估CRC筛查项目中M2PK的灵敏度和特异性。

当前愈创木脂粪便潜血试验（FOBT）在结肠直肠癌的筛查方面已经取得了非常好的临床效果。《对于结肠直肠癌筛查，检测甲基Wif-1基因比粪便潜血试验更准确》进行一项包括所有参考结肠镜检查筛查（2003-2007）连续项目的前瞻性研究。在进行结肠镜检查之前，采集粪便（新鲜粪便，血清S和尿液U）并执行了FOBT。测量粪便、血清和尿液中从63个基因中选出的3个基因的甲基化水平。对粪便中KRAS突变、7种显性基因和占第二位优势的细菌种群进行了量化。Hosmer-Lemeshow卡方对校准进行了评估，通过计算C统计（曲线下面积）和净重新分类对改进指数进行判别。研究表明后天性饰变和粪便微生物群的变化，也就是失调，与CRC的发病机理有关，可作为CRC的替代标志物。在该研究中，检测粪便、尿液或血清样品中的甲基化wif-1，在检测晚期肿瘤方面与FOBT相比，具有更高的准确度。需要未来的研究探索微生物群是否可以作为晚期结肠直肠癌肿瘤的标志物，尤其是使用在利用后备细菌或元基因组测试的情况下。血清和尿液Wif-1甲基化测试可以在拒绝接受粪便测试的人群中使用，并应该在大规模筛查的背景下接受评估。

《婴儿中肾损伤生物标志物—中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白和肾损伤分子-1的参考区间》于2010年6月-2014年3月间收集106名出生一天至一岁健康婴儿（妊娠37-42周后出生的婴儿）的血清和尿液样本。检测血液样本的血清肌酐水平来确定健康的肾脏状态，检测尿液样本中的肌酐、uNGAL和uKIM-1，研究婴儿群体中缺乏肾损伤新型尿液生物标志物——中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白和肾损伤分子-1的可靠参考区间，目的是在婴儿群体中建立尿液NGAL和KIM-1绝度浓度的参考区间，同时标准化按照年龄间隔分类的尿肌酐。此研究说明了1岁以下儿童（按照年龄段分类）的uNGAL和uKIM-1的参考区间，这些参考区间的应用可填补尿液生物标志物在临床实验室中的参考数值。本研究中，uNGAL水平在出后生达到峰值，然后逐渐降低，在一岁时达到最低。女孩的NGAL水平高于男孩，性别差异是本研究的另一个重要发现。另外，研究显示小型选择性外科手术并没有改变uNGAL和uKIM-1水平，说明在此期间并未发生肾小管损伤。研究提供了一岁健康婴儿的uNGAL参考水平，证明随着年龄的增加uNGAL水平降低，且女孩高于男孩。在大部分个体中，uKIM-1水平低于检测下限，并不与年龄、性别或种族相关。这些参考区间可用于评估两种生物标志物在检测早期肾小管损伤中的性能，尤其是检测AKI的幼儿，因为母体对SCr水平存在影响，且GFR的生理变化与年龄相关。

在非心脏手术患者中血浆中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（pNGAL）用于预测急性肾损伤（AKI）的性能还没有明确报道。《在经受重大非心脏手术的ICU患者中血浆NGAL对于急性肾损伤的预测价值》研究151名患者，采集患者入住ICU后0小时和6小时的血样。初步结果是根据急性肾损伤网络（AKIN）分类，患者在入住ICU后48小时内发生AKI，调查在经受重大或极大的非心脏手术后入住重症监护室的患者中pNGAL对于早期检测AKI的用途。该研究的结果表明pNGAL水平与AKI严重性相关。尤其需要注意的是，数据证明了pNGAL在预测更严重AKI（AKIN 2期或以上）上的作用，与先前的观察结果一致。pNGAL还可以很好地预测RRT需求。但是，可能不比传统参数像SCr和eGFR好。根据IDI度量值评估，将pNGAL增加到临床AKI预测模型中有些益处。然而，在使用AUROC方法时此改善没有显著的统计学差异。在经受重大或极大非心脏手术的ICU患者中，pNGAL与AKI的严重性和肾替代疗法的需求相关。但是，将pNGAL增加到临床AKI预测模型中没有多少优势。

中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白产生于对肾小管损伤的反应。在罹患慢性肾病的患者中，对比剂急性肾损伤和不良预后有关。《亚临床和临床对比剂急性肾损伤：用于测定形成对比剂肾病（ENCINO）风险的新型血液标志物数据》进行前瞻性研究，对取自患者的血液样品进行随机评估，这些患者估算的肾小球滤过率介于15-90mL/min/1.73m2之间，患者均经受使用碘化对比剂的选择性冠状动脉造影。在注入对比剂之后的基线、1、2、4、6、12、24和48小时的时间点测量血液NGAL和血清肌酐，研究血液NGAL水平以及经受冠状动脉造影CKD患者的肾损伤水平。研究描述了不同CKD阶段血液NGAL基线值的特点。在每个阶段，注入对比剂后的NGAL从基线水平上升并高于基线水平。在KDIGO标准之外使用NGAL鉴别出更多数量的患者因临床或亚临床CIAKI被认为具有升高的发病率和死亡率。未来研究需要使用亚临床CI-AKI的新型标志物 和传统CI-AkI定义的血清肌酐来评估包括CKD加速恶化、再次入院、心脏事件和死亡率在内的短期和长期临床预后的风险。

《吉非替尼诱导非EGFR依赖性自体吞噬并通过克拉霉素靶定自体吞噬来增强吉非替尼在非小细胞肺癌细胞中的细胞毒作用》指出吉非替尼是EGFR酪氨酸激酶的抑制剂，可强有力地诱导非小细胞肺癌细胞株内的自体吞噬，比如PC-9细胞以及野生型EGFR A549和H226细胞。出乎意料地，GEF诱导的自体吞噬也在非NSCLC细胞中观察到，比如鼠胚胎成纤维细胞和白血病细胞株K562和HL-60但是没有EGFR表达。在经过GEF处理后，通过CRISPR/Cas9系统敲除A549细胞内的EGFR基因仍然显示出自体吞噬诱导，表明GEF诱导的自体吞噬不是通过抑制EGFR激酶活性介导的。克拉霉素是大环内酯类抗生素，具有抑制自体吞噬流的作用。虽然单独使用CAM处理显示没有细胞毒性，但是GEF和CAM联合处理增强了NSCLC细胞株的细胞毒作用。GEF处理诱导了内质网应激相关基因比如CHOP/GADD153和GRP78的上调。CHOP敲减PC-9细胞和CHOP敲除MEF对GEF的灵敏度均小于对照细胞。在培养基中加入CAM产生了更明显的GEF诱导ER应激负荷，而单独使用CAM没有影响。这些数据表明GEF诱导的自体吞噬起到保护细胞的作用，并且标志着CAM与GEF联合处理具有潜在的治疗可能性。此外，已表明由于响应GEF而启动自体吞噬的细胞内信号传导可与EGFR完全分离，但是可能存在未知的GEF靶标分子以诱导自体吞噬。

HE4已成为前景看好的妇科肿瘤生物标志物，《血清HE4作为子宫内膜癌预后标志物：一项基于人群的研究》从前瞻性的澳大利亚全国子宫内膜癌研究中选取373例患者，在经过临床认证的实验室，用Architect仪器定量测定围手术期患者HE4和CA125水平。采用受试者工作特征曲线、Spearman秩相关系数、卡方检验和Mann Whitney检验进行统计分析。用Kaplan-Meier和Cox多因素回归分析进行生存分析。基于子宫内膜癌患者队列研究，评价血清HE4作为风险预测的生物标记物的价值。来自大规模、基于人群的队列的数据证实HE4升高与侵袭性子宫内膜腺癌表型有关，即使是在低度恶性的子宫内膜样子宫内膜癌子集中也是如此。HE4是子宫深肌层浸润预后差的独立标志物，其预测价值优于CA125。研究得出的阴性预测值和灵敏度值与以前发表的MRI的阴性预测值和灵敏度值相当，提示在确定无需做淋巴结切除术的低危患者时HE4测定可能是一种更经济有效的方法。

《两种新一代戊型肝炎病毒样颗粒的基因型及其与已知基因型的抗原特性比较》提及了基于日本野猪提取的具有唯一核苷酸序列的2种新基因型（G5和G6），这两种基因型能否引起人体戊型肝炎尚未可知。目前，住院患者身上从未发现G5和G6基因型。为了研究G5和G6的抗原特性，研究人员使用重组杆状病毒系统删节过的氨基端（N端）HEV ORF2蛋白质进行呈现。野猪是HEV的一个宿主，野猪分离出去的G3和G4 HEV可能作为一种动物性传染病传染给人类。除了G3和G4 HEV，至少有三种其他新的HEV毒株从日本野猪身上被分离出来（基因库登记号AB573435，AB602441和AB856243）。先前的基因分析证明，从野猪身上分离出来的新型的HEV与G1、G2、G3和G4 HEV的核酸序列一致性低于80%，而且这些新型的分离株最近被认为在物种Orthohepatitis A中构成了G5和G6 HEV。但是，从不同的野猪身上检测出了G5和G6 HEV，而且G5和G6 HEV是否能够传播到人以及其他动物身上的问题尚未解答。不仅如此，目前还没有建立这些HEV细胞生长培养机制，G5和G6 HEV的流行病学、病理学和抗原性尚不清楚。由于G5和G6 VLP显示出与其他人体HEV及其相似的抗原性和血清型，该产物的产量显著高于从其他HEV获得的产量。因此，G5和G6VLP可能有助于疫苗的开发。

2014年7月29日，梅奥诊所检验医学、儿科学教授Piero Rinaldo在AACC年会上发表了关于“21世纪新生儿先天性代谢缺陷筛查”的报告。他从传统的新生儿筛查模型，讲到用串联质谱法（MS/MS）进行新生儿筛查，并详细介绍了推荐统一筛查组合（RUSP）和Region 4Stork（R4S）合作项目及其扩展。从分析的角度来说，未来新生儿筛查扩展应该以更高的特异性为方向。随着更多地依赖基于大规模数据共享和全球合作的分析后解读工具，在美国筛查100多种疾病同时保持每天的假阳性数量低于100的目标是可以实现的。他从21世纪前十几年的新生儿先天性代谢缺陷筛查、未来发展的性能挑战、如何改善性能、大数据和下一代软件四个方面进行分析，指出未来新生儿筛查扩展应该以更高的特异性为方向，最好先改善“旧的”试验。随着更多地依赖基于大规模数据共享和全球合作的分析后解读工具，在美国筛查100多种疾病同时保持每天的假阳性数量低于100的目标是可以实现的。R4S为未来发展规划了一幅蓝图，但并不限于新生儿筛查。CLIR 2.0于2014年11月1日上线。有了分析图谱，CLIR可以帮助我们计算出比率（包括所有标志物）。对1个以上协变量的内嵌调节功能可替代传统的参考范围（比如与年龄一致）。

犹他大学医学院Patricia Slev与David R. Hillyard两位教授同时在2015 AACC年会中就“HCV和HIV在感染诊断和管理中的检测问题”进行报告，以病例为开端介绍HCV感染诊断和管理中的检测问题，详细说明慢性丙型肝炎病毒恶化的自然病程、HCV传播的风险因素、筛查与检测规则；分子试验指示的信息、基因组、检测下限、分子确认问题、实时确认试验的问题、美国的HCV基因分型、HCV及基因分型的方法和问题；慢性丙型肝炎的治疗、指导疗法的两个趋势等问题。面对如此严峻的形式必须对HCV的诊疗进行革新，HCV诊疗的革新应包括如下几个方面：病毒的发现，这是进行诊断和治疗的基础；改进治疗学，加深对HCV的认识；革新检验技术、综合使用高质量分子试验对HCV进行检测和分型；推广更大范围的人口筛查；通过教育，筛查和资源整合，并基于有效的管理建立专业团队；建立经济学模型让慢性HCV感染得到经济有效的医疗护理。

下一代测序技术正在越来越多地应用于传染病的诊断和监视，美国分子病理学会评估NGS在临床微生物学中的应用。评估的重点是基因型药物的耐药性检测；临床标本中与疾病相关未知病原体的直接检测以及人宿主微生物种群多样性研究和菌株分型。《下一代测序在传染病诊断和管理中的应用》列举了下一代测序在病毒耐药性突变检测、HIV-1、CMV、临床标本的病毒鉴别、靶向测序或WGS鉴别、rRNA测序中的应用，许多研究已经进行了概念验证试验或研究调查，基于NGS的试验也已经被微生物学实验室有选择地用于诊断。常规应用很有可能会增加成本、周转时间但能充分降低复杂性，使NGS能作为现有比较经济的、值得考虑的更简单方法，对当前使用的试验进行补充。在现在这个时候，NGS的作用是补充而不是取代传统的诊断测试。有一项重要的障碍，即使在最精密的临床实验室中，尽管大规模的宏基因组学的努力如人类微生物群系项目定义了大量的序列和功能之间的新相关性，但是许多临床相关微生物的基因分型表型相关性也是未知的。最后，NGS方法在传染病诊断测试中的远大的前景需要临床微生物学家能够成功地开发试验，解析和评估NGS数据并将这些数据应用到适当的临床环境中。

2015年“国际动态”更多的聚焦国际学术动态，将世界最前沿、最新颖的研究成果与报告介绍给国内IVD行业。更多的聚焦IVD企业的研究动向、产品趋势、合作动态等，将最新的产品信息、技术信息、合作信息、研发信息呈现给国内IVD行业。2016年《临床实验室》“国际动态”栏目将继续站在国际视角、接轨国际时效、展示国际动态，“国际动态”将继续秉承时效性、国际性、前沿性、动态性，使读者了解国际IVD行业实时动态信息。