一例特殊的血细胞散点图的特殊处理

案例分析

我们在做血细胞分析时肯定会遇到这样的问题，散点图有效粒子数稀少，看技术参数914，VCS的标准是7500+，那这个结果准确吗？（图1）

先回顾下VCS技术，就是运用电阻抗、电导、散射光三种探针在流式通道中对白细胞逐个、同时、三重的检测形成三维散点图以确定其亚群的性质。

软件根据特定原理识别白细胞亚群，使光电信号转换为数字信号，每一个样本总共计数8192个粒子数（图2），就会停止计数，进入分析环节。

随机某个样本为例（图2），软件分析7917，比8192少，主要去除一些非细胞光学特征的颗粒的影响（尘埃、杂质）。最后显示到散点图上的才是有效粒子数7907，主要去除破坏的白细胞、难溶红细胞的干扰。

这里要注意，每个样本总粒子数8192是恒定的，分析粒子数和有效粒子数都不一样，因为每个样本的环境不一样，化学平衡过程也是不一样的。理论上保障有效粒子数达到7500+，结果比较可靠，如果很多样本有效粒子数小于7500，怎么解决----化学平衡(Conductivity Matching)。

定义：样本与2种溶血素反应后在白细胞形态学上达到的平衡状态，这个过程是在混匀池中进行。（图3）

酸性溶血剂（E-Lyse）与样本同时进入混匀池，酸性溶血剂的渗透压较小，使细胞膨胀，因为红细胞膜上胆固醇成分比白细胞多，所以红细胞先膨胀破裂，白细胞只是膨胀但未破裂；碱性溶血剂(S-Lyse)的渗透压比较大，补偿了样本中未破裂白细胞的渗透压，当白细胞内外的离子浓度平衡时，细胞停止皱缩，准备进流动池进行分析。这个过程叫做化学平衡，其结局是通过流动池的粒子只能是WBC，而且要接近于人体自然状态的WBC。

所以影响化学平衡最关键的个因素：样本和2种溶血素。

了解这个过程，我们开始做化学平衡，宗旨：调节样本与2个溶血剂的比例使化学再平衡。

首先第一个要素是选择样本，它必须具备一定的条件：正常的青中年人的新鲜血，而且受试者必须健康，不能有基础疾病，无不良嗜好，血细胞计数项目必须在正常的参考范围。

样本吸样量固定34ul，酸性溶血剂的量也是固定的548ul，所以我们唯一可以调节的是碱性溶血剂的量，设定起始量（图4），比如230ul，按梯度逐渐增量3ul，第一列碱性溶血剂（diff preservative volume）的量230-233-257，设定尽量大的浓度梯度。第二列有效粒子数（goodcount），随着碱性溶血剂的量逐渐增大，有效粒子数也随之增多，之后又开始减少，原因是碱性溶血剂过量后，使细胞微环境又中性变为碱性，导致白细胞大量破裂，有效粒子数逐渐。

所以我们要做的是找到最佳的平衡点（图5），横坐标碱性溶血剂的量，纵坐标有效粒子数，最后确定247ul作为本次平衡的终点。

这个过程就是化学平衡，同样也解决了现实中存在的一个问题：分类包2种溶血剂使用不均衡，一瓶还有剩余，另一瓶已空，所以说好的化学平衡不仅可以使结果更准确，降低样本重测率，缩短TAT，也可以节约试剂降低耗占比。

再看结果的影响（图7），淋巴和嗜碱变化比较大。

案例总结：临床上遇见此类的案例，如果是偶然一次，重新检测即可解决，因为化学平衡影响因素很多：环境温度、湿度、 大气压、混匀池的混匀速率、34ul的样本进入混匀池的速率、样本问题等等，如果高概率重复出现，则必须做化学平衡。