PCR仪主机维护之计量校准

作者：王晓燕同济大学附属东方医院胶州医院 2022-07-05

聚合酶链反应分析仪是完成聚合酶链反应的必备仪器，是微量核酸测量必需的主要设备之一，已经广泛普及于生物学相关的各个实验室，成为生命科学研究、临床检验、法医检验、血液制品检验、食品微生物检验、动植物物种研究与检验等实验室的必备仪器设备之一。特别是随着定量PCR仪的开发和发展，聚合酶链反应分析仪在生命科学领域、食品科学领域、药物研发和生物技术产品开发领域发挥着越来越重要的作用[1],也是目前新冠核酸检测的主要设备。

在日常工作中，PCR仪的维护保养，是保证检测结果稳定可靠的重要前提。下面撷取一个关于PCR仪主机维护的案例，与君共飨。

新冠核酸20-in-1样本，无扩增图谱（图-1）；查看弱阳性质控，扩增曲线正常（图-2）；查看反应孔位置H1（图-3）：

图-1

图-2

图-3

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标本复检，内参曲线明显（图-4）；同时H1位置进行弱阳性质控的检测，H1位置仍然无扩增无线（图-5）。

图-4

图-5

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H1位置可能出现了曝光值，通过roi校准进行处理：通过校准反应板生成的目标区数据，判断出反应板上特定反应孔中荧光强度的增量，以修正光学系统中的微小差异。

roi校准后，H1反应孔弱阳性质控扩增曲线（图-6）正常：

图-6

通常情况下，定量PCR仪主机的维护主要包括三部分：电源开关、主机表面清洁和仪器校准。仪器校准包括roi校准、背景校准、纯荧光校准、空间校准等。其思维导图（图-7）如下：

图-7

具体操作示例：

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JJF1527-2015《聚合酶链反应分析仪校准规范》自2015年6月15日由国家质检总局批准发布并于2015年9月15日起实施，旨在保证聚合酶链反应分析仪测量量值的准确，具有可溯源性，使不同仪器之间的测量数据具有可比性。

CNAS-CL02-A009: 2018《医学实验室质量和能力认可准则在分子诊断领域的应用说明》，条款5.3明确提出了实验室设备校准要求：

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目前，新冠疫情形势依然严峻，如何保证仪器本身的性能符合要求，能够用于所开展的工作并对取得的检测结果有据可寻，目前我国在这方面的工作还没有得到足够重视和广泛开展。PCR 仪的主要性能参数如温控精确性、升降温速率、样品孔之间温度均匀性等，一般仅在说明书或使用手册中给出类似的技术指标，各个使用部门对这些参数并不十分了解，多数情况下只是按照实验程序进行样品检测使用，PCR 仪本身是否提供了符合要求的环境，温度控制是否变化等很少进行具体的分析或深入的考虑。

在我国多数使用 PCR 仪的行业或部门，包含各个科研院所、鉴定中心、检测机构、实验中心等，包含从传统的增量 PCR 仪到先进的荧光定量 PCR 仪等各种型号，但是对于 PCR 仪的计量检测和量值溯源基本处于空白。

即便有这样的需求，由于现有设备和实际条件，也很难完成这样的工作，使得 PCR 仪长期处于大量使用，但却无法计量校准的地步，在一定程度上也影响了与此相关科研工作的有效进展。

原因一方面是由于生产和使用者没有足够的重视，管理不规范; 另一方面则是由于配套仪器落后，造成实际校准难以实现。

国外对于 PCR 仪的检测工作主要由仪器生产厂或耗材厂家来进行，采用专门用于 PCR 仪检测的配套设备。在美国、欧洲等发达地区，对于 PCR 仪的计量检测已形成较强的意识，进行定期检测( 一般每 6 个月进行一次) ，而 PCR 仪在我国的计量校准与量值溯源处于发展中阶段[2]。

科学合理的检测设备是进行计量校准的关键，选择合理的设备进行 PCR 仪的校准工作，以满足量传溯源需求。

• 参考文献

［1］高运华．JJF1527-2015《聚合酶链反应分析仪校准规范》解读［J］．中国计量， 2016，8(55) : 117-118

［2］金志军，黄伟．基因扩增仪计量校准重要性与方法分析［J］．计量与测试技术， 2018，45( 11) : 69-70

编辑：骆秉涵

【来源：检验之声】

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