做检验前,别忘了看看试剂的空白吸光度

作者:luoer   2023-03-17

试剂空白吸光度是反映试剂质量的指标之一。

每种试剂都有一定的空白吸光度范围,试剂空白吸光度的改变往往提示该试剂的变质

试剂空白吸光度是反映试剂质量的指标之一,但不能反映试剂质量的全部。试剂成份、纯度、用量稳定性,才是保证试剂质量的关键所在。
原则上,吸光度上升的反应,其试剂空白吸光度越低越好,不能超过一个高限;相反,吸光度下降的反应,其试剂空白吸光度不能低于一个低限。因此,试剂空白吸光度限值,常作为程序参数输入仪器,如经核查超限,仪器会自动报警,提示更换试剂。需要指出的是,还原型辅酶I(或II)等投料量不足或劣质的原料,往往需要加大用量,才使“表观”吸光度上升,凑合过试剂空白核对的“关”,其后果为如下情况:

1、  线性范围变窄 现象:高值测不高。原因:生产试剂时有效成分投料量不足;试剂成份稳定性较差。

2、 灵敏度变低 现象:酶促反应速度曲线斜率下降,测定结果有严重系统误差。原因:试剂底物浓度不足。

3、  低值偏高 现象:试剂空白的变化曲线(吸光度VS时间)明显波动。原因:试剂自身不稳定,自行分解;工具酶纯度不够,杂酶含量超限,导致干扰作用。
 
试剂抗干扰作用的合理性有些液体双试剂,其实质并不真正具备抗干扰的能力而只是解决了试剂的液体化和稳定性问题。
ALT试剂盒中,NADH在pH7.5~7.8水溶液中极不稳定,在pH>8.7时才能稳定保存。因此,为了保证试剂稳定性,液体双试剂的R1需要维持pH>8.7,但此时LDH活性大大下降,就失去消除内源性丙酮酸的功能,只有加入试剂R2后,反应混合液的pH下降至LDH最适pH,在经过延迟时间60 S后,才能消除内源性丙酮酸的干扰。

做试剂空白目的之一就是观察试剂是否稳定,积极采取措施纠正

总的说来,自动生化仪上的试剂空白一般表现为零点吸光度,该吸光度是通过校准确立的。

正确的试剂空白校准才能出具符合质量要求的检验结果

以不稳定的脂肪酶为例:



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