尿液显微镜检,如何换算高低倍视野与微升

作者:张时民   2023-06-13

问题

1、两种单位的结果如何转换?

许多情况下仪器会出两种单位的结果,仪器厂家已经依据他们设计好的方案进行了转化,或许不需要换算。

但实验室需要做内部比对,人机比对,性能验证,参考区间确认,或许就需要进行换算了。
具体怎样操作,可能还是一头雾水。不仅是检验人员,连设备开发厂商的团队也不一定搞得很明白。

2、均值与定量单位如何转换?

传统的显微镜报告格式是x-xx个细胞/HPF或x-x个管型/LPF,也很容易换算为均值,根据你计数的某种有形成分总数和视野数,就可以拿到平均值的结果。

各种尿液有形成分仪器报告的方式是xx个细胞/μl或xx个管型/μl,报告单位是微升(1ml=1000μl,1μl=1mm3)。当然厂家或设备软件也许可以帮你转为传统单位,或者两种单位共存。

3、镜检法与仪器法如何转换?

我们还知道,尿沉渣镜检是分为离心镜检和直接镜检的两种模式,而尿液有形成分分析的仪器法,均使用非离心的方法,那么离心镜检法和未离心的仪器法是怎样的关系呢?如何换算的?如果你科室有不同品牌和不同规格的显微镜又该怎么办呢?

回答

1、先从显微镜目镜开始

显微镜一般分为低倍镜、高倍镜和油镜。但是尿液有形成分检查只使用高倍镜和低倍镜。

显微镜目镜放大倍率一般为×10倍。但是显微镜下的视野面积完全不同,这就需要关注其视场数值(这一点大家都不清楚吧)。目前各种显微镜的视场数值是不同的,有18mm,20mm,22mm,25mm,26.5mm等多种不同(图1-图4),具体标识在目镜镜头上,就是“/”后面的那个数值,叫做视场数值,或者简写为FN(Field Number)值。显微镜下看到的圆形的视野面积大小就和这个FN值有关,虽然物镜头上也会标有FN值,但这对视野下面积影响不大。

FN数值的大小是和视野下的面积密切相关的,就像你看到的小范围视野面积和大视野(宽视野)面积是完全不同的。我们都知道圆形的面积公式等于πr2,因此与显微镜下圆的直径和半径有关的。不同FN值的目镜所看到的面积和细胞数量是完全不同的。请看山东省医院沈亚娟老师提供的两幅对比图(图5,图6),标本位置不动,分别用FN=20和26.5的两种目镜观察如下的视野。在FN为26.5的视野下看到更多的东西,例如红箭头所指,在FN为20的视野中没有看到这些东西或不全,说明视野面积完全不对等。

因此要换算高倍视野和低倍视野与μl的关系,首先应该确认你用什么FN值的显微镜目镜。我们国内关于尿沉渣镜检,只规定了所用的物镜头分别为×10和×40,即高倍镜和低倍镜,但是没有规定所用目镜的要求。所以在国内文献中找到相关答案就比较难,只能先参考国外的资料和标准吧。下面三个不同FN值的视野下所看到的视野下面积,和视野下包含的细胞数量完全不同(图7)。

因此在三个不同目镜下,看到的视野面积和其中包含的细胞数量,明显不同。

据了解目前最大视野的目镜FN值为26.5mm,视野下面积为551.27mm2,约为FN18的目镜下面积的2.17倍。

了解不同FN值的显微镜视野,对实验室内人员比对很重要,推荐实验室使用统一FN值的显微镜,如果不一样,则可能导致一些换算问题。

2、尿液标本的离心和制备

我国各类教科书和行业标准要求:取10ml混合均匀的尿液标本,以400g离心力离心5min,弃去上清液液,保留沉渣0.2ml(200ul)。因此尿液标本被浓缩50倍。

取20μl(0.02ml或)尿液标本滴于载玻片上,再加18mm×18mm的盖片一张(面积为324mm2),确保无溢出,无气泡,覆盖均匀,这样在盖玻片下覆盖了20μl的标本,其平均厚度约0.062mm。如果不加盖玻片是无法达到标本均匀一致的(图8)。

3、换算

下表中表达分别为

LPF:低倍视野

HPF:高倍视野

FN:视场数值

视野直径 =FN值÷目镜放大倍率;
视野半径 =(FN值÷目镜放大倍率)÷2;
视野面积:S=πr2

盖玻片下覆盖样本厚度或高度(mm):

体积=面积×高,

高=体积/面积,

因此盖玻片下

标本高度=样本量(mm3)÷盖片面积(mm2

每个盖玻片324mm2面积下可以包含多少个低倍视野或高倍视野,很容易算出。

如果将20ul(20mm3)标本平均分布在边长为18mm×18mm的盖玻片下,其总覆盖面积为324mm2,因此标本液面高度约为0.062mm。以此计每个视野下覆盖的标本体积(镜头下视野面积×高度)和还原离心浓缩50倍后的结果,也就是相当于计数未离心浓缩前的样本量,以便和自动尿有形成分分析仪具可比性,见表2。

如果你使用的显微镜FN值为上述表格中的一种,可以参考,如果不是,就需自己计算。可以看出如果使用FN=26.5的目镜,所看到的视野下范围和样本量,是FN=18的目镜的一倍多。

山东省医院检验科沈亚娟教授为我提供的另一张对比图(图9,图10),同一个视野,不同FN的目镜,有一些不同的发现吧,这就是大视野的优势。

讨论

1、同一实验室应该使用相同FN数值的显微镜,以便统一报告结果,增加可比性。

不同FN数值的显微镜目镜,其视野面积下观察到的范围和细胞数量是不同的。

同一个实验室在尿液检验专业领域,无论是在门诊、住院部、急诊或分院区,应该使用相同FN数值的显微镜,以便统一报告结果,增加可比性。在进行人工镜检和仪器测定数量对比时,一定要考虑到FN数值的特点,建立自己实验室的换算方案。公认的镜下血尿红细胞>3个/HPF,其来源已久,当时是在什么条件下做出的,目前无据可考(早年的显微镜FN数值不会超过20)。如果考虑到视场数值最小与最大,其观察量可相差一倍,那么这个RBC数量可能就不是3个/HPF。

2、行业标准中,应增加FN的标准

在国内检验教材、行业标准中,除了规范尿量、离心力、沉渣量和盖玻片的规范外,还应增加视场数值(FN)的标准。

国内专业学术团体应该考虑,或有条件的实验室可以根据自己所用显微镜,视场数值等标准,重新定义镜下血尿或脓尿的标准。

3、重视仪器法与镜检法的对应数值换算

不同厂家及不同品牌的尿液有形成分分析仪,其报告的每微升多少细胞或管型与对应换算而来的高倍/低倍视野的数值,请咨询相关厂商。

反对 0 收藏 0 评论 0