自制乙肝表面抗原室内质控
作者：六盘水市人民医院检验科 孙乾敏 杨敏 彭莹
[摘要] 目的：自制实验室乙肝表面抗原（HbsAg）室内质控。方法：将HbsAg阴性血清和阳性血清按一定比例混合，找出弱阳性倍数。该弱阳性OD值取该试剂盒CUT-OFF的2-3倍。同时与临检中心提供的HbsAg质控品作比较。结果：找出的质控品的S/CO值均值为2.345，该值在半年之内无明显变化。结论：自制HbsAg弱阳性标本可以作为室内质控。
目前，国内基本上采用ELISA法检测乙肝表面抗原，该方法操作方便，快捷，但由于此方法学特点，批内，批间的CV值较大。为了防止结果出现偏差，仅靠商品试剂盒配带的阴阳性质控对照，达不到控制各种因素造成的误差，给HBV感染者的临床诊断和治疗带来了混乱，因此建立室内质控非常重要[1]。本文将参照卫生部临床检验中心的标准和要求，研制出稳定符合质控品要求的医院自用的HbsAg室内质控标准品[2]。
现就本室开展室内质控的措施和体会报告如下：
1 材料和方法：
1.1 仪器
酶标仪：深圳雷杜RT-2100C， 洗板机：上海新波Egage2310
1.2 试剂：夏门英科新创，批号：2010016103
1.3 方法：
1.3.1 分别收集乙肝表面抗原阳性和阴性标本血清，要求血清无黄疸，无溶血，无脂血。将血清56Cº，30min灭活，3000r/min,离心15min。
1.3.2 用HBsAg阴性血清梯度稀释HbsAg阳性血清，找出该试剂盒CUT－OFF的2-3倍的稀释倍数。该稀释后的血清定为弱阳性血清。将弱阳性血清按半年使用量统一配制，然后再按一周实验用量子弹头分装，标记，-20 Cº冻存。
1.3.3 将稀释后的弱阳性血清进行二个批次的检测，每次不少于10个测试，建立质控图参数。然后从第21次测试开始，记录并监控质控状态。同时每次测试均带有临床检验中心配制的室内质控作比较，以便监控实验的重复性和稳定性，同时可以了解孔间差异。
2 结果：
根据两个批次做出的S/CO值算出质控参数：
1）算术平均值：X＝2.345
2）标准差:S=0.465
3）变异系数：CV＝19.83%
绘制质控图：最常用的质控图是Levery-Jennings质控图，以S/CO值作纵座标（Y轴），每天试验作横座标（X标），从21次起，将每次质控血清的检测结果依次点入质控框图中，检验进入质控状态。自制的室内质控在半年的使用中，共做质控120次，失控12次。分析失控原因，有5次洗板机不通畅，标本之间交叉污染，有3次质控室温放置时间过长，导致结果偏低。终上所述，排出实验室交叉污染，条件改变等外界因素引起失控外，失控率为3.3%，在控率为96.7%。
结论：弱阳性标本结果基本在控。说明自制的弱阳性标本含量未有太大的差异，可作为室内质控使用。
3 讨论：
3.1 乙肝病毒的慢性携带者占我国人口的10%－20%，乙肝病毒可导致肝脏慢性炎症坏死和纤维化，部份患者可转化为肝硬化甚至肝癌，已成为严重的社会和公共卫生问题。HbsAg是诊断乙肝的主要手段，但是由于ELISA定性法受反应温度，反应时间，交叉污染等多种因素影响，特别是低值弱阳性常漏判，自制简便，经济，重复性好的HbsAg室内质控，提高检验质量。
3.1 质控规则的使用应检出随机误差和系统误差，即具有高的检出分析误差的能力，同时应具有较低的假失控概率。考察试验系统的可靠性应采用多标准质控方案，多规则质控方法能提高误差，并具有低的假失控概率。其要点为：出现一次2S范围的变化时，系统处于告警状态，应注意，是否可以继续检测需要进一步观察。出现下列情况时，应暂停查找原因：出现一次3S范围的变化，连续两次出现同一方向2S范围的变化，连续四次出现出现同一方向的1S范围的变化，连续10次结果都在1S范围内，但均值的同一侧。当出现失控时进行如重复质控测定或重新分析新质控物不是最的效的方法，必需找出问题原因，找出解除故障的方法，并削除原因，防止还会出现同样的问题。
3.2 影响ELISA法实验精密度的因素除方法学本身的误差外，日常实验中酶标仪的性能，洗板机的质量，操作者的质量控制意识等都是很重要。酶标仪和洗板机要注意维修和保养，尤其是洗板机在使用后一定要用蒸馏冲洗管道，否则时间长了管道会出现絮状沉淀而堵孔，导致样品孔清洗不净或孔间交叉污染，出现假阳性。检验人员在分析前，分析中和分析后都要严格把关，做到眼到手到心到。因此，实验中，有效控制各种可能发生的影响因素，为实验结果提供了强有力的保障，也是室内质控的最终目的。
参考文献
[1]范秀芹，林凌云，岳志蹦等。室内质控问题的探讨[J].中国煤炭工业医学杂志，2002.1：89-92
[2]王露楠，吴健民，李金明等。丙型肝火病毒核试验酸检测的国家标准物质的研制[J].中华检验医学杂志，2006.4：354-355
