食管癌贲门癌患者T淋巴细胞、NK细胞免疫功能检测及意义
作者：刘江惠 李建涛 贺宇彤 戴晓晖 郭建文 左连富
【摘要】 目的 本研究检测食管癌、贲门癌患者的免疫功能，寻找肿瘤患者的病情量化指标，用来预测和判定临床治疗效果。方法 采集本院胸外科手术前的食管癌贲门癌患者115例及359例正常体检者的血液标本，应用流式细胞术检测外周血T淋巴细胞表面CD3、CD4、CD8及NK细胞（CD56）的表达。结果 食管癌、贲门癌组与健康对照组相比较CD3、CD4有明显下降（P＜0.05），而CD8、CD56有明显的增高（P＜0.05）。将癌症组分为淋巴结转移组和无淋巴转移组，两组间CD3、CD4、CD8、CD56的差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论 食管癌外周血T细胞免疫检测有助于了解疾病的发展进程。
【关键词】 食管癌；贲门癌;T淋巴细胞亚群；NK细胞；CD3；CD4；CD8；CD56
现代肿瘤免疫学研究表明，肿瘤的发生和发展同机体免疫系统功能异常存在密切关系，而抗肿瘤免疫主要以细胞免疫为主，其中胸腺依赖性淋巴细胞即T淋巴细胞又是细胞免疫系统的关键组成部分〔1〕。机体内的T淋巴细胞能识别肿瘤细胞，在接受肿瘤细胞刺激后，转化为能攻击和杀伤肿瘤细胞的致敏淋巴细胞,有着免疫监视机能。一旦这种监视机能遭到破坏，患肿瘤的危险就将增加。免疫功能正常与否，直接关系到肿瘤的发生、发展和预后。因此对于T淋巴细胞的研究越来越受到免疫学界和医学界的重视，成为近年来的研究重点。食管癌是目前我国发病率较高的恶性肿瘤之一，本研究就是通过对食管癌贲门癌患者外周血T淋巴细胞以及NK细胞相关指标的检测，来探讨食管癌贲门癌患者T淋巴细胞及NK细胞功能同食管癌贲门癌发生和发展的关系，以便临床上监测食管癌人群的免疫状态，对其免疫治疗具有重要的意义。
1 材料与方法
1.1 标本来源
标本来自河北医科大学第四医院2006～2007年间搜集的115例食管癌患者，包含发生转移56例，未发生转移59例，患者平均年龄60岁，男87例，女28例。食管癌患者在采样前均未经手术、放疗、化疗等方法治疗。正常体检者血液标本359例作为正常对照组，其中男151例，女208例，平均年龄53岁。采集静脉血2 ml，EDTAK2抗凝。
1.2 实验方法
1.2.1 细胞的免疫荧光标记
取抗凝全血0.1 ml，加入鼠抗人单克隆CD3FITC/CD56PE，CD4FITC/CD8PE；双标记抗体20 μl，（美国，BECKMAN COULTER公司生产，克隆系CD4：13B8.2,CD8:B9.11），室温孵育30 min。在免疫荧光制备仪上裂解红细胞后，流式细胞仪检测各亚群百分比。
1.2.2 流式细胞仪检测条件及参数
采用美国Beckman Coulter公司生产的EpicsXLⅡ型流式细胞仪，激发光源为15 mW氩离子激光器，激发波长为488 nm，应用Expo 32 ADC进行免疫荧光数据分析。
1.3 统计学处理
应用SPSS11.5统计软件包，进行t检验、单因素方差分析。
2 结果
免疫功能检测结果：经单因素方差分析发现4个指标（CD3、CD4、CD8、CD56）在癌症组与正常对照组间比较有统计学意义(P＜0.05)，见表1。将癌症组分为淋巴结转移组和无淋巴结转移组，经单因素方差分析发现4个指标（CD3、CD4、CD8、CD56）在两组间均没有差异(P＞0.05)，见表2。表1 癌症组与正常对照组免疫指标比较，表2 有无淋巴结转移组间免疫指标比较(略)
3 讨论
恶性肿瘤作为一种免疫功能异常所导致的疾病得到了医学界的广泛共识，恶性肿瘤患者机体的免疫调节作用及其效应网络大多处于一种相对紊乱的状态，其中包括机体多种淋巴细胞、细胞因子、黏附因子及共同刺激因子等众多因素中单个因素或多个因素的失衡，而细胞免疫的紊乱在肿瘤免疫中具有主导作用，因此近年来对于T淋巴细胞和NK细胞等细胞免疫的主要效应细胞的研究已经成为现代肿瘤免疫学研究的重点。CD3是成熟T淋巴细胞的共同分化抗原，表达于所有成熟T淋巴细胞的表面，代表组织和血液中总的成熟T淋巴细胞〔2〕。陈罡〔3〕等的研究发现，在肝癌组织中，肿瘤细胞产生的肿瘤特异性抗原刺激肿瘤特异性T细胞在肿瘤组织中聚集、成熟，使得肝癌组织中的CD3+T细胞数量明显高于肝硬化组织及正常肝组织。冯伟华〔4〕等的研究显示，在实体肿瘤和非实体肿瘤中患者外周血CD3+CD56T细胞测定值在实体肿瘤组显着低于非实体肿瘤组和健康组，非实体肿瘤组和健康对照组间比较无显着性差异。由于本次实验的研究对象为食管癌贲门癌，也是实体肿瘤的一种，加之又都是应用流式细胞术检测外周血，所以本文中CD3+的表达情况同冯伟华等的报道相一致。基于以上文献的报道和本次试验的结果推测，食管癌贲门癌这类实体肿瘤患者的外周血CD3+T淋巴细胞数量较正常对照组显着降低可能是
