液体血凝试剂的优势和挑战
液体血凝试剂比干粉血凝试剂具有明显的优越性，所以液体试剂是目前国内外血凝试剂的发展趋势。但迄今国内外真正使血凝试剂实现液体化的厂家并不多。这是因为，研发液体血凝试剂会遇到更多的困难和挑战。
血凝试验是通过手工或血凝仪将两种溶液（血浆和试剂）混合并记录凝血时间的过程。干粉试剂（通常为冻干品）必须按厂家要求添加定量复溶液（厂家提供）或高纯水（用户自备），使其“复溶”，即恢复到冻干前的溶液状态。复溶过程存在一
定风险：① 取液器不准，使有效成分的浓度与冻干前不同，从而导致凝血时间延长（浓度降低）或缩短（浓度提高）；②复溶液或高纯水被污染导致酸碱度发生变化或微生物生长，抑制或破坏有效成分，使凝血时间延长；③ 不同冻干品复溶时间不同，有的一分钟即可完成，有的则需要数十分钟才能完全复溶。复溶不完全会影响有效成分发挥作用，延长凝血时间；④ 如果冻干品附着在瓶塞上，复溶时必须把试剂瓶颠倒过来，使瓶塞上的有效成分进入溶液中，否则也会导致凝血时间延长；⑤ 操作不慎，如复溶时剧烈震动试剂瓶，产生大量气泡，蛋白质或酶就会在气泡表面变性，也会影响凝血时间。所以，复溶对于血凝试剂而言应该说是一种缺点。
除悬浮溶液外，液体试剂中的所有成分都是均一的。通常情况下，任何局部成分都与整体成分完全一致，灌装时不会使成分或浓度发生变化，所以瓶间只有装量误差，试剂有效成分的浓度完全相同。但冻干前分装和冻干后复溶过程产生的体积误差却造成了干粉试剂瓶间有效成分的浓度差异。由于液体试剂不存在瓶间或批内差问题，从而提高了测定的准确性。
液体试剂的确给用户带来了极大方便，但同时也给研发者提出了挑战。
最严峻的挑战就是如何确保液体血凝试剂的稳定性。除APTT 外，其它3 种试剂的主要成分都是蛋白质或酶。PT 的主要成分是组织因子（或凝血因子川），它是由263 个氨基酸残基组成的跨膜蛋白；而FIB 和TT 试剂的主要成分都是凝血酶。蛋白质和酶都是生物大分子，它们的活性依赖于其自身正确的精细空间结构的维系。在液体状态下，其结构非常脆弱，酸、碱、温度的变化以及某些化合物的少量存在都会引起这种空间结构的改变甚至瓦解：即使局部结构的微小变化也会引起生物活性的丧失。所以，冻干一直是保持生物大分子活性的最佳选择。然而即使是冻干品，如果发生“吸潮”现象，也会使活性很快丧失。克服蛋白质变性是研发液体血凝试剂的关键。蛋白质和酶的变性分为可逆变性和不可逆变性。可逆变性是指，在极端条件下（如高温、酸、碱以及变性剂的存在）蛋白质的空间构象发生变化，当极端条件消除后，又可以大部分或完全恢复活性：而不可逆变性则是变性一旦发生，再也无法恢复。所以，要使蛋白质和酶的活性长久保持不变，就必须了解它们的结构和功能，创造一切条件使它们在液体条件下保持变性的可逆性。在这方面，基因和蛋白质结构数据库为研发者提供了方便条件。
蛋白质变性通常是由于外界因素引起的。但在一定条件下，有时酶也会“自我消化”，导致整体活性下降。此时唯一的办
法就是尽量消除一切可能促使酶发生“自我消化”的条件。
微生物生长是威胁液体血凝试剂稳定性的另一个因素。含酶的液体试剂不能用高压蒸汽灭菌，否则酶很快发生不可逆变性。常用的办法是将试剂通过0 . 22μm 的滤膜，使微生物留在滤膜上。但开盖和取液后又会被微生物污染，这就是为什么试剂一旦开盖后保存期就变短的原因。另外，在液体试剂中添加防腐剂也是阻止微生物生长的常用方法，但必须保证所选择的防
腐剂对试剂的有效成分无害，而且不影响血凝试验。
反复冻融不会影响FIB 和TT 试剂，但会破坏PT 和APTT 。原因是，PT 和APTT 都含有起关键作用的脂质体，这是一种由类脂膜形成的微小球体，亲水层在膜外，殊水层在膜内。构成PT 主要成分的组织因子必须将它的一端以正确的取向嵌入脂质体中，否则就没有活性或活性很低。而APTT 也是由类似结构和鞣花酸组成的，二价金属离子可能起桥梁作用，将二者联
系在一起。反复冻融会使脂质体破裂，导致PT 和APTT 失去活性，这就是为什么PT 和APTT使用说明书往往标明“严禁冻融”的原因。如无特殊设备，液体血凝试剂在冬季运输过程中常常发生冻结。如何解决液体血凝试剂的抗冻问题是摆在研发者面前的另一个挑战。在我国，研制抗冻PT 和抗冻APTT 有一定的现实意义，然而迄今国内外尚无抗冻血凝试剂出现。
分子生物学技术和酶工程技术是研发稳定的全液体血凝试剂的有力工具。在国家大力扶植和全体科研人员的努力下，保定天岳生物工程有限公司在国内首次推出了具有完全自主知识产权的全液体血凝试剂盒。TT 和FIB 液体试剂有相当好的稳定性，37℃稳定一个月，60℃高温处理3小时仍然保留原有活性。这就为临床测定凝血酶时间和纤维蛋白原含量创造了条件；同时我公司还推出了抗冻PT 和抗冻APTT试剂盒．经多次反复冻融，其外观和凝血时间不变。在实际使用过程中，该试剂盒得到了我国寒冷地区用户的好评。
保定天岳生物工程有限公司生产的系列全液体血凝检测试剂盒具有稳定性好、敏感度高、不怕冻等优越性能，且完全实现了国产化，并获得了国家科技部创新基金。保定天岳生物工程有限公司正以振兴民族工业为己任，以替代昂贵的进口血凝试剂
为目标！积极进取、不断创新，努力为中国的检验事业贡献自己的一份力量。
血凝试验是通过手工或血凝仪将两种溶液（血浆和试剂）混合并记录凝血时间的过程。干粉试剂（通常为冻干品）必须按厂家要求添加定量复溶液（厂家提供）或高纯水（用户自备），使其“复溶”，即恢复到冻干前的溶液状态。复溶过程存在一
定风险：① 取液器不准，使有效成分的浓度与冻干前不同，从而导致凝血时间延长（浓度降低）或缩短（浓度提高）；②复溶液或高纯水被污染导致酸碱度发生变化或微生物生长，抑制或破坏有效成分，使凝血时间延长；③ 不同冻干品复溶时间不同，有的一分钟即可完成，有的则需要数十分钟才能完全复溶。复溶不完全会影响有效成分发挥作用，延长凝血时间；④ 如果冻干品附着在瓶塞上，复溶时必须把试剂瓶颠倒过来，使瓶塞上的有效成分进入溶液中，否则也会导致凝血时间延长；⑤ 操作不慎，如复溶时剧烈震动试剂瓶，产生大量气泡，蛋白质或酶就会在气泡表面变性，也会影响凝血时间。所以，复溶对于血凝试剂而言应该说是一种缺点。
除悬浮溶液外，液体试剂中的所有成分都是均一的。通常情况下，任何局部成分都与整体成分完全一致，灌装时不会使成分或浓度发生变化，所以瓶间只有装量误差，试剂有效成分的浓度完全相同。但冻干前分装和冻干后复溶过程产生的体积误差却造成了干粉试剂瓶间有效成分的浓度差异。由于液体试剂不存在瓶间或批内差问题，从而提高了测定的准确性。
液体试剂的确给用户带来了极大方便，但同时也给研发者提出了挑战。
最严峻的挑战就是如何确保液体血凝试剂的稳定性。除APTT 外，其它3 种试剂的主要成分都是蛋白质或酶。PT 的主要成分是组织因子（或凝血因子川），它是由263 个氨基酸残基组成的跨膜蛋白；而FIB 和TT 试剂的主要成分都是凝血酶。蛋白质和酶都是生物大分子，它们的活性依赖于其自身正确的精细空间结构的维系。在液体状态下，其结构非常脆弱，酸、碱、温度的变化以及某些化合物的少量存在都会引起这种空间结构的改变甚至瓦解：即使局部结构的微小变化也会引起生物活性的丧失。所以，冻干一直是保持生物大分子活性的最佳选择。然而即使是冻干品，如果发生“吸潮”现象，也会使活性很快丧失。克服蛋白质变性是研发液体血凝试剂的关键。蛋白质和酶的变性分为可逆变性和不可逆变性。可逆变性是指，在极端条件下（如高温、酸、碱以及变性剂的存在）蛋白质的空间构象发生变化，当极端条件消除后，又可以大部分或完全恢复活性：而不可逆变性则是变性一旦发生，再也无法恢复。所以，要使蛋白质和酶的活性长久保持不变，就必须了解它们的结构和功能，创造一切条件使它们在液体条件下保持变性的可逆性。在这方面，基因和蛋白质结构数据库为研发者提供了方便条件。
蛋白质变性通常是由于外界因素引起的。但在一定条件下，有时酶也会“自我消化”，导致整体活性下降。此时唯一的办
法就是尽量消除一切可能促使酶发生“自我消化”的条件。
微生物生长是威胁液体血凝试剂稳定性的另一个因素。含酶的液体试剂不能用高压蒸汽灭菌，否则酶很快发生不可逆变性。常用的办法是将试剂通过0 . 22μm 的滤膜，使微生物留在滤膜上。但开盖和取液后又会被微生物污染，这就是为什么试剂一旦开盖后保存期就变短的原因。另外，在液体试剂中添加防腐剂也是阻止微生物生长的常用方法，但必须保证所选择的防
腐剂对试剂的有效成分无害，而且不影响血凝试验。
反复冻融不会影响FIB 和TT 试剂，但会破坏PT 和APTT 。原因是，PT 和APTT 都含有起关键作用的脂质体，这是一种由类脂膜形成的微小球体，亲水层在膜外，殊水层在膜内。构成PT 主要成分的组织因子必须将它的一端以正确的取向嵌入脂质体中，否则就没有活性或活性很低。而APTT 也是由类似结构和鞣花酸组成的，二价金属离子可能起桥梁作用，将二者联
系在一起。反复冻融会使脂质体破裂，导致PT 和APTT 失去活性，这就是为什么PT 和APTT使用说明书往往标明“严禁冻融”的原因。如无特殊设备，液体血凝试剂在冬季运输过程中常常发生冻结。如何解决液体血凝试剂的抗冻问题是摆在研发者面前的另一个挑战。在我国，研制抗冻PT 和抗冻APTT 有一定的现实意义，然而迄今国内外尚无抗冻血凝试剂出现。
分子生物学技术和酶工程技术是研发稳定的全液体血凝试剂的有力工具。在国家大力扶植和全体科研人员的努力下，保定天岳生物工程有限公司在国内首次推出了具有完全自主知识产权的全液体血凝试剂盒。TT 和FIB 液体试剂有相当好的稳定性，37℃稳定一个月，60℃高温处理3小时仍然保留原有活性。这就为临床测定凝血酶时间和纤维蛋白原含量创造了条件；同时我公司还推出了抗冻PT 和抗冻APTT试剂盒．经多次反复冻融，其外观和凝血时间不变。在实际使用过程中，该试剂盒得到了我国寒冷地区用户的好评。
保定天岳生物工程有限公司生产的系列全液体血凝检测试剂盒具有稳定性好、敏感度高、不怕冻等优越性能，且完全实现了国产化，并获得了国家科技部创新基金。保定天岳生物工程有限公司正以振兴民族工业为己任，以替代昂贵的进口血凝试剂
为目标！积极进取、不断创新，努力为中国的检验事业贡献自己的一份力量。
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