阴道炎五联检试剂对阴道分泌物检测的临床意义初步探讨

                                                                                      西安医学院第二附属医院门诊检验科      赵小军

       【摘要】 目的 评估阴道炎五联检试剂的临床应用价值。方法 妇科门诊患者1575例阴道分泌物同时用阴道炎五联检试剂检测和显微镜镜检，并接种念珠菌显色平板和阴道毛滴虫培养基；乳酸杆菌、细菌性阴道病以革兰氏染色镜检为标准，白细胞以湿片镜检为标准，念珠菌性外阴阴道炎和滴虫性阴道炎以培养结果为准。结果 阴道炎五联检试剂与相关金标准比较，在白细胞、BV和滴虫检测方面，差异均无显著性意义(P>0.05)；在判断乳酸杆菌和念珠菌方面，差异有显著性意义(P<0.05)。结论 阴道炎五联检试剂基本能够满足临床检测需要，操作方便，准确客观，具有一定的临床应用价值。
       【关键词】 阴道分泌物；阴道炎；检测 

       阴道炎是妇科门诊常见多发疾病，主要包括细菌性阴道病(Bacterial vaginosis,BV)、念珠菌性外阴阴道炎(Vulvovaginitis candidal,VVC)、滴虫性阴道炎(Trichomonal vaginitis ,TV)及其他阴道炎症。此类疾病多由阴道菌群失调、病原体侵入等引起。检测阴道炎的传统方法为白带常规检查[1]，即通过阴道pH值，清洁度及微生物检查来判断女性白带是否异常。此法要求检测人员有丰富的经验，且主观性强，工作量大。目前市场出现一种干化学酶法试剂——阴道炎五联检试剂盒，其灵敏度高，特异性好，操作简便。为考察该产品的临床性能和应用价值，作者选取了1575例女性阴道分泌物样本进行白带常规与阴道炎五联检试剂检测，并依据湿片镜检、革兰氏染色、培养法等金标准进行确认，对检测结果进行比较分析。

对象与方法

       1．对象：2012年2月1日~2012年3月31日西安医学院第二附属医院门诊检验科进行阴道分泌物检测的共1575例样本。用无菌女性专用长拭子2支从阴道后穹窿取分泌物样本分别放入2支试管内，立即对比检测。排除样本标准：24小时内进行性生活、盆浴、阴道灌洗的样本，局部上药或正在吃药或停药不超过1周的患者样本，血样本，经期样本。
       2．试剂：阴道炎五联检试剂盒（批号20120117）由郑州安图绿科生物工程有限公司生产，革兰氏染液（批号409071）由四川迈克生物科技股份有限公司生产，念珠菌显色平板（批号20111208）由上海科玛嘉生物技术有限公司生产，阴道毛滴虫培养基（批号20111208）由上海彤云贸易商行生产。
       3．方法：对于同一样本分别用显微镜和阴道炎五联检试剂盒进行检测，并接种念珠菌显色平板（37℃培养48小时）和阴道毛滴虫培养基（37℃培养72小时）。其中念珠菌和滴虫均以培养结果为金标准，白细胞以湿片镜检为准，乳酸杆菌以革兰氏染色涂片镜检为准，BV以革兰氏染色涂片镜检结合Nugent 评分来确认。严格按照阴道炎五联检试剂盒说明书进行操作。
       4．统计学分析：应用SPSS19.0统计软件对所得数据进行统计学分析。采用卡方检验分析两种方法的差异（检验水准a =0.05）。

结 果

       1．乳酸杆菌检测结果见表1：五联检试剂通过H2O2间接检测乳酸杆菌，从表1结果分析可知，五联检试剂检测乳酸杆菌与革兰氏染色镜检判乳酸杆菌对比结果的灵敏度为97.72%、特异性为69.03%、阳性预测值为87.87%、阴性预测值为92.30%、总符合率为89.02%，差异有显著性（x² =86.03，P <0.05）。

       2．白细胞检测结果见表2：五联检试剂检测白细胞酯酶诊断白细胞与湿片镜检白细胞相比，灵敏度为91.22%、特异性为95.09%、阳性预测值为88.34%、阴性预测值为96.42%、总符合率为94.02%，差异无显著性（x² =2.06，P >0.05）。

       3．BV 检测结果见表3：线索细胞确认BV阳性例数255例，五联检试剂检测唾液酸苷酶及脯氨酸氨肽酶来诊断BV的灵敏度为83.61%、特异性为97.24%、阳性预测值为87.93%、阴性预测值为96.11%、总符合率为94.60%，差异无显著性（x² =2.31，P >0.05）。

       4．滴虫检测结果见表4：五联检试剂通过乙酰氨基葡萄糖苷酶结合pH≥4.8判断滴虫与培养法比较：灵敏度为95.83%、特异性为99.80%、阳性预测值为93. 88%、阴性预测值为99.87%、总符合率为99.68%，差异无显著性（x² =0，P >0.05）。

       5．念珠菌性阴道炎检测结果见表5：五联检试剂通过乙酰氨基葡萄糖苷酶结合pH≤4.6判断念珠菌与培养法结果比较：灵敏度为86.08%、特异性为93.39%、阳性预测值为73.21%、阴性预测值为96.97%、总符合率为92.12%，差异有显著性（x² =17.84，P <0.05）。

讨 论

       白带是阴道分泌物的俗称。正常白带中菌群构成复杂，乳酸杆菌为其优势菌。乳酸杆菌产生的过氧化氢可抑制杂菌生长，保持阴道清洁，且过氧化氢浓度与乳酸杆菌数量呈正相关。本研究表明五联检试剂通过检测过氧化氢浓度，间接指示乳酸杆菌的结果与显微镜镜检差异有显著性意义(P>0.05)。乳酸杆菌在显微镜下形态各异，某些乳酸杆菌与其他菌不容易区分（如棒状杆菌同为革兰氏阳性杆菌），容易造成假阳性；五联检试剂通过检测过氧化氢从而检测乳酸杆菌避免了部分漏检和假阳性。存在的问题是部分乳酸杆菌不产生过氧化氢，五联检试剂对这部分乳酸杆菌会造成漏检。
       在阴道感染炎症时，白细胞特别是多核型白细胞会通过趋化作用由阴道上皮细胞粘膜渗透到阴道分泌物中。白细胞酯酶是位于白细胞膜上的一种蛋白，其活性与多核型白细胞数量呈正相关[2]。但白细胞包括单核型白细胞和多核型白细胞，且单核型白细胞不具有该酶活性，因此理论上讲，该酶不能完全反映白细胞情况，存在假阴性可能，但对于破损的白细胞仍可检测。湿片镜检只能观察完整白细胞，破损则无法观察。两种方法各有局限。本研究结果表明五联检试剂盒与显微镜镜检白细胞差异无显著性意义(P>0.05)。
       近年来多项研究表明阴道分泌物中唾液酸苷酶活性与细菌性阴道病（BV）有关[3-5]。BV患者的阴道菌群失调主要表现为阴道加德纳菌、普雷沃菌、拟杆菌、动弯杆菌、消化球菌以及支原体增多，而乳酸杆菌的数量明显减少。目前临床检测 BV 的酶学方法有唾液酸苷酶法和脯氨酸氨基肽酶法两种[6-7]，普雷沃菌、拟杆菌及部分加德纳菌具有唾液酸苷酶活性，而加德纳菌和动弯杆菌具有脯氨酸氨基肽酶活性，因此 BV 本身的特点决定了唾液酸苷酶结合脯氨酸氨基肽酶判断 BV 更全面和准确。本研究表明五联检试剂盒与线索细胞和Nugent 评分结合比较差异无显著性意义(P>0.05)，而线索细胞与Nugent 评分均需要革兰氏染色，不利于临床操作，因此五联检试剂盒更利于临床开展 BV。
       滴虫与念珠菌检测公认的金标准为培养法，但目前绝大多数医院基本靠镜检来检测，对于滴虫受其活性影响容易出现假阴性，而念珠菌由于孢子在显微镜视野中分布不均匀容易造成漏检。研究表明白色念珠菌和滴虫均具有氨基葡萄糖苷酶活性[8-10]，因此可以通过该酶把白色念珠菌和滴虫检出来，又因为正常白带pH3.8~4.5，滴虫白带pH较高，可>5~6，念珠菌白带pH4.0~4.7，所以阴道炎五联检试剂通过与pH值结合可以把念珠菌与滴虫区分开来，念珠菌白带pH不大于4. 6，而滴虫白带pH不小于4. 8。存在的问题是近年来光滑念珠菌的检出率在逐渐升高，而部分光滑念珠菌本身不含氨基葡萄糖苷酶，所以会造成漏检，但相对于镜检来说，酶法对念珠菌的检出率较高。
       本研究结果表明，阴道炎五联检试剂在对乳酸杆菌、白细胞、BV、TV、VVC 的诊断上和相关金标准方法相比总体上无明显差异。常规镜检耗时费力，主观性强，需要丰富的经验，而阴道炎五联检试剂操作方便，结果准确客观，能够基本满足临床对白带检测的需要，具有一定的临床意义。

参考文献
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                                                                                                                编辑：范伟伟