耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）检测试剂盒
导读：近年来，由于人类滥用抗生素，不断使细菌产生新的耐药性。近几年超级细菌的报道尤其多。金黄色葡萄球菌作为临床上常见的感染性细菌，自从本世纪40年代青霉素问世并广泛使用后，金黄色葡萄球菌也表现出极强的抗药性。为了方便诊治此类疾病，国内外行业企业一直都致力于此类快速检测试剂的研发与应用，用。定向点金作为IVD领域知名网站的创立公司，业务覆盖平面媒体、网络、翻译、会议、注册、临床六大服务体系，全方位的为IVD从业人员提供全面、优质、专业的服务，非常关注此类试剂的研发与应用。现将整个试剂盒的技术及检验方法进行了全面报道，与行业人士共同分享。如果大家想保存全文，可直接下载临床实验室杂志2010年第7期电子版杂志，或向本刊发行部010-88820003王主任免费索第7期刊。
北京青元盛康生物医药科技有限公司 供稿
金黄色葡萄球菌是临床上常见的感染性细菌，自从本世纪40年代青霉素问世后，金黄色葡萄球菌引起的感染性疾病受到较大的控制，但随着青霉素的广泛使用，有些金黄色葡萄球菌产生青霉素酶，能水解β-内酰胺环，表现为对青霉素的耐药。因而人们又研究出一种新的能耐青霉素酶的半合成青霉素，即甲氧西林(methicillin)。1959年应用于临床后曾有效地控制了金黄色葡萄球菌产酶株的感染，可时隔两年，英国的Jevons就首次发现了耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin resistant Staphylococcus aureus，MRSA)。这种耐药性在世界范围内迅速传播，且其发生率处于不断增长趋势。80 年代以来，国内外临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)一般占金葡菌的20%-50%，近几年有升高趋势，某些综合性大医院高达80%以上。MRSA从发现至今感染几乎遍及全球，已成为院内感染的重要病原菌之一，所以对其进行体外快速检测对医生制定抗生素治疗的使用方案具有重要意义。
1、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的耐药机理
MRSA耐药性的产生与细菌产生一种青霉素结合蛋白(PBP)有关。青霉素结合蛋白(penicillin binding proteins, PBPs) 由金黄色葡萄球菌自身合成。普通的金黄色葡萄球菌合成5种与β-内酰胺类抗生素亲和力较高的PBPs，包括PBP1、PBP2、PBP3、PBP3′和PBP4，相对分子质量为87×103、80×103、75×103、70×103和41×103。PBPs参与合成细菌细胞壁的转肽酶、羧肽酶和内肽酶，催化糖肽交叉联接反应，对细菌的生长繁殖起着极其重要的作用。β-内酰胺类抗生素与之共价结合后，PBPs失去活性而阻断细胞壁的合成，导致细菌死亡。
而MRSA产生了一种独特的PBP，这种分子量增加了78～1000道尔顿的PBP，因其电泳率介于PBP2与PBP3之间，故称为PBP2a或PBP2′。PBP2a蛋白属高分子量PBP，具有与高亲和力PBPs相同的青霉素结合基序，结合能力却很低，能在MRSA中高亲和性PBPs结合β-内酰胺类抗生素失活后，代替PBPs，维持细菌的生长和存活，从而使MRSA表现出耐药性。
2、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的检测方法
2.1 药物敏感性实验
对MRSA 的检测临床上应用最广泛的就是药物敏感试验方法： 但MRSA 的检出易受到培养基成分，特别是NaC1含量、pH 值、接种量、孵育时间、温度以及培养基中是否加诱导剂等多种因素的影响，方法不当易造成临床上漏检或误检。目前，国内外绝大多数实验室对MRSA 的检测都是参考NCCLS推荐的药物敏感试验标准方法进行的。主要方法为：纸片扩散法、微量肉汤稀释法和琼脂筛选法。
2.2 PCR技术
多聚酶链反应(PCR)技术的问世，为人们提供了新的MRSA检测方法。mecA基因高度保守，根据其核苷酸序列设计不同的引物，用PCR对菌株中PBP2a靶DNA特定片段mecA进行扩增，以mecA基因存在与否判定是否为MRSA菌株，由于PCR方法特异性强、灵敏度高、不受药敏试验条件的影响而在鉴定中得到广泛应用，被公认为是其诊断的金标准。
2.3 胶体金技术
北京青元盛康生物医药科技有限公司自主研发生产的固相层析免疫技术为人们提供了新的MRSA检测方法，应用层析式双抗夹心法的原理检测待测样本中MRSA的特征蛋白PBP2a，PBP2a蛋白是mecA基因所编码的一种独特的蛋白。MRSA菌株中可以检测到PBP2a，所以临床通过检验PBP2a蛋白，从而进行MRSA感染的体外诊断。
胶体金检测法由抗PBP2a单克隆抗体和抗鼠IgG分别固相硝酸纤维膜和胶体金标记的抗PBP2a单克隆抗体及样本垫、胶体金垫和吸附垫组成，应用层析式双抗体夹心法的原理检测样本中的PBP2a。用胶体金对菌株中PBP2a靶蛋白进行检测，以PBP2a靶蛋白的存在与否判定是否为MRSA菌株。
临床和实验室标准化研究所（CLSI）“抗菌药物敏感性试验执行标准”中提到：检测mecA和其表达的青霉素结合蛋白2a（PBP2a，也称为PBP2a’）是预报对甲氧西林耐
