8种第3代和4种第4代人免疫缺陷病毒抗体诊断试剂的比较_检验世界网

　　作者：李秀华 许四宏 宋爱京 聂建辉 王佑春

　　【摘要】

　　目的   分析第3代和第4代HIV诊断试剂间以及同一代各种试剂间的差异。

　　方法  用8种第3代试剂和4种第4代试剂分别检测989份人免疫缺陷病毒(HIV)阴性样品、185份HIV-1核酸阳性样品、HIV抗体第一代国际参考

　　品以及9套BBI阳转血清盘，并判定检测结果。

　　结果  第4代试剂对HIV感染的检出时间普遍早于第3代试剂，但不同的第4代试剂的检出时间并不相同，不同的第3代试剂在HIV抗体的检出时间

　　方面没有明显的差别。各种试剂检测不同基因型的能力不同，尤其国产试剂检测HIV-1 O组和HIV-2的能力普遍较差。

　　结论  本研究为试剂质量的进一步提高提供了实验数据。

　　【关键词】人免疫缺陷病毒；诊断试剂；基因型；阳转血清

　　自1985年第1代HIV抗体诊断试剂问世以来，目前国际上已有数十家公司生产HIV检测试剂。根据不同HIV诊断试剂所用抗原的来源、检测的靶标记物以及试剂的检测原理，将其分为4代产品：第1代试剂主要是使用天然的HIV全病毒抗原制备诊断试剂，采用免疫荧光素和酶标记的抗人IgG抗体，检测抗HIV IgG抗体；第2代试剂主要使用基因工程重组和/或人工合成肽做为抗原，采用间接法的原理检测抗HIV IgG抗体；第3代试剂主要使用基因工程重组抗原并采用双抗原夹心法的原理检测抗HIV的总抗体；第4代试剂是将HIV抗原和抗HIV-1 p24抗体同时包被载体，加入待检血清进行孵育，最后加入酶标记的HIV抗原和抗HIV-1 p24抗体，可同时检测血清中的HIV-1 p24抗原和抗HIV抗体。机体感染HIV后一般在6-12周间产生抗HIV的抗体，6周以前病毒在机体内复制，可产生大量的病毒核酸以及抗原，这段时间称为HIV感染的窗口期。处于窗口期的样品具有较强的感染性，为减少其传播的危险性，应增加相应的检测指标。从理论上讲，第4代试剂由于既可检测HIV-1 p24抗原也可以检测HIV抗体，其检出HIV感染的时间要早于第3代试剂。目前用于血液筛查的HIV抗体试剂主要是第3和第4代试剂，为正确评价各试剂检测指标的差异，必须选择有代表性的样品，研究采用本科室保存的HIV抗体阴性样品库和核酸阳性样品库、HIV不同基因型样品以及BBI阳转血清盘，对12家不同试剂的技术指标进行评价。

　　材料和方法

　　样品：阴性样品库样品989份，全部为HIV抗体阴性；阳性样品库样品185份，全部为HIV-RNA阳性，对其中148份样品已完成基因型分析，B’亚型为50份，BC重组型为85份，AE重组型为13份；英国生物制品标准化和质量控制研究所(NIBSC)提供的不同基因型参考品样品6份(HIV抗体第1代国际参考品，NIBSC编号：02/210，其中HIV-1 A、B、C和E亚型，HIV-1 O组以及HIV-2抗体阳性样品各1份)以及美国BBI公司阳转血清盘样品9套(编号分别为PBR924、PBR930、PBR944、PBR945、PBR949、PBR952、PBR955、PBR957和PBR958)。

　　试剂：共计使用12种试剂，其中第3代试剂共8种(包括国产试剂、进口试剂)，第4代试剂共4种，其编号按以上顺序依次为试剂1-12。

　　检测方法及结果判断：将NIBSC提供的HIV抗体第1代国际参考品样品用阴性血浆进行4倍稀释，然后进行倍比稀释，稀释至4096倍，用以上12家试剂对阴性样品库、阳性样品库、不同基因型的系列稀释样品以及阳转血清进行平行检测。对阳性和阴性库样品检测结果不一致者进行双份复试，并以复试结果为准。所有实验操作及结果判定均严格按试剂说明书进行。

　　统计学方法：对BBI阳转血清盘样品，以第3代试剂中某进口试剂为参比试剂，参考WHO对HIV抗体检测试剂的评价报告，计算每种试剂的阳转血清相对敏感性系数。对HIV阳性库样品及HIV阴性库样品，分别计算每份样品的S/CO值，然后计算S/CO值的平均值(x)和标准差(s)，最后分别计算每种试剂检测阴性样品和阳性样品的δ值；同时计算每种试剂的特异性和敏感性及其95％可信区间(CI)、阴性预期值(NPV)和阳性预期值(PPV)。所有计算公式如下：

　　δ=(lgx)÷s；NPV=检测到的真阴性样品数量÷(真阴性样品数量+假阴性样品数量)；PPV=检测到的真阳性样品数量÷(真阳性样品数量+假阳性样品数量)；95％ CI:p±1.96×[p(1-p)/n]1/2(其中p为特异性或敏感性，n为样品数量)。

　　结果与讨论

　　1．阴性样品库和阳性样品库样品的检测：阴性样品库共有989份HIV-1抗体阴性样品，经12种试剂检测，结果8种第3代试剂中有6种试剂(试剂1、2、4、5、6和7)均检测为HIV抗体阴性，特异性为100％，而试剂3和试剂8分别检测出987和986份样品为HIV抗体阴性，其特异性分别为99.80％和99.70％；4种第4代试剂均存在不同程度的假阳性，试剂9、10、11和12分别检测出975、972、970和981份样品为HIV抗体阴性，其特异性分别为98.69％、98.38％、9