流行性感冒快速诊断试剂灵敏度对比分析

流行性感冒（流感）是最常见的传染性疾病之一。即使接种了流感病毒疫苗，由H1N1pdm09、H3N2和乙型流感病毒引起的季节性流感仍在全球各地传播，全球每年约有29.1万至64.6万人死于流感相关的呼吸道系统疾病^[1]。同时，来自鸡和猪等其他物种的甲型流感病毒亚型也已经引起了散发的人类感染。例如，在亚洲国家和埃及，家禽中流行的高致病性流感病毒H5N1以及H7N9已经传染给人类。

目前，全球流感防控主要依靠疫苗接种以及抗病毒药物治疗。然而，由于很难及时制备针对H5和H7病毒的疫苗，抗击这类病毒的第一道防线依然是抗病毒药物治疗，包括神经氨酸酶（NA）抑制剂和核酸内切酶抑制剂。特别值得一提的是，NA抑制剂（如奥司他韦、扎那米韦、帕拉米韦和拉尼米韦）需在症状出现后的2天内使用，才能获得最佳疗效^[2,3]。快速、简便和高灵敏的流感病毒检测就显得尤为重要。由于病毒分离和RT-qPCR这些基本病毒学方法耗时长且需要大型专业设备，不适用于临床广泛使用。因此，流感快速诊断试剂（IRDT，Influenza Rapid Diagnostic Tests）正受到全球医疗机构的普遍关注和青睐。

日本东京大学医学研究所微生物和免疫学系病毒科Yuko Sakai-Tagawa、Seiya Yamayoshi和Yoshihiro Kawaoka教授在《Frontiers in Microbiology》杂志发表的《流感快速诊断试剂灵敏度评价（2018-2019流感季）》中，针对H1N1pdm09、H3N2、H3N2、H5N1、H5N6、H7N9以及B/Victoria和B/Yamagata病毒，就2018-2019流感季期间市场上主流的23种IRDT试剂产品（5种使用分析仪判读的IRDT和18种人眼判读的IRDT）的灵敏度进行了对比分析，现将结果介绍如下。

一、应用分析仪判读的IRDT的灵敏度更高

日本学者在研究中所选用的23种IRDT都使用了免疫层析法来检测季节性甲流和乙流病毒。IRDT的灵敏度主要取决于其单克隆抗体的结合动力，大部分IRDT试剂都采用了抗甲型和乙型流感病毒核蛋白（NP）的小鼠单克隆抗体。裂解液的成分、分析物在样本中的比例以及检测结果的呈现方法等都会影响检测的灵敏度。

分析物在样本中的比例在很大程度上取决于IRDT使用的试纸条式还是孔式检测方法。试纸条式是指将试纸条浸入裂解后的样本中，在试纸条上发生反应；而孔式则是将裂解后的样本滴入加样孔中，在封闭的塑料盒中进行反应。其中19种IRDT采用了孔式检测方法，样本输入比例为6.7%到30%（表1）。

检测结果的呈现方法在23种IRDT中也有所不同：Espline Influenza A&B-N使用碱性磷酸酶及其底物，Spotchem FLORA FluAB使用荧光乳胶微球，Sofia Influenza A+B FIA使用铕，而其他的使用金-、金+银-、金+铂-或非乳胶荧光微球来显示免疫复合物。23种IRDT都可以在15分钟内完成检测（表1）。

研究发现，使用分析仪判读的IRDT的灵敏度与人眼判读的IRDT的灵敏度相似或更高，尤其是在病毒早期。就季节性流感病毒而言，鼻咽洗液的病毒滴度通常在发病最初的24-72小时内达到102-106 TCID50/100µl^[4]。两类IRDT都可以检测到患者体内的流感病毒。然而，如要在24小时内检测到流感病毒，使用分析仪的IRDT比其他试剂具有更高的灵敏度（表2）。

二、季节性甲流病毒检测灵敏度高于乙流病毒

研究结果显示，23种IRDT均检测出了甲、乙型流感病毒，但灵敏度有所不同，23种IRDT对季节性甲流病毒的检出限范围为101到106 TCID50/100µl（表2），对H3N2病毒的灵敏度往往低于H1N1pdm09病毒。与季节性甲流病毒相比，对乙流病毒的灵敏度稍低或类似。23种IRDT对B/Victoria和 B/Yamagata的检出限范围为102到106 TCID50/100µl（表2）。其中，Sofia Influenza A+B FIA对接受测试甲、乙型流感病毒的检出限范围为101-104 TCID50/100µl，是接受测试试剂中对季节性甲、乙型流感病毒最敏感的IRDT，提示该IRDT可用于诊断由此类病毒引起的流感。

三、H5和H7病毒检测灵敏度差异大

23种IRDT对两种H5N1病毒（H5-1和H5-2）的检出限范围为103到105 TCID50/100µl（表3），对三种H5N6病毒（H5-3、H5-4和H5-5）的检出限范围为102到106 TCID50/100µl，其中对H5-3和H5-4的灵敏度比H5-5低10-100倍。而23种IRDT对于三种H7N9病毒（H7-1、H7-2和H7-3）的检出限范围为101到106 TCID50/100µl（表3），其中，对H7-3的灵敏度比H7-1和H7-2高出100-1,000倍。Sofia Influenza A+B FIA对H5和H7病毒的检测灵敏度最高，与对季节性甲、乙型流感病毒的灵敏度相当，可用于诊断由此类病毒引起的流感。

日本学者还在研究报告中指出，随着检测技术的不断改进，IRDT的灵敏度也得到了提升，需继续定期监测IRDT的灵敏度变化。此外，临床亟需可检测耐NA或PA抑制剂病毒的新的快速检测试剂盒，以帮助医生选择最适当的抗病毒治疗。

快臻贸易（上海）有限公司 供稿

参考文献

1. Lancet：全球季节性流感死亡人数增加.https://www.sohu.com/a/220257088_632000.

2. McNicholl, I. R., and McNicholl, J. J. (2001). Neuraminidase inhibitors: zanamivir and oseltamivir. Ann. Pharmacother. 35,57-70. doi:10.1345/aph.10118.

3. Yamashita, M. (2010). Laninamivir and its prodrug. Antivir. Chem. Chemother. 21, 71-84. doi:10.3851/IMP1688.

4. World Health Organization Writing Group, Bell, D., Nicoll, A., Fukuda, K., Horby, P., Monto, A., et al. (2006). Non-pharmaceutical interventions for pandemic influenza, international measures. Emerg. Infect. Dis. 12, 81-87. doi: 10.3201/eid1201.051370