产KPC型碳青霉烯类耐药肠杆菌对头孢他啶-阿维巴坦体外敏感性及敏感性降低机制研究

作者：崔晓燕  杜鸿

1. 研究目的：检测未接受过头孢他啶-阿维巴坦（ceftazidime-avibactam，CAZ-AVI）治疗的产KPC型碳青霉烯类耐药肠杆菌（KPC-producingCarbapenem-ResistantEnterobacteriacea KPC-CRE）对CAZ-AVI的体外敏感性；研究产KPC型肺炎克雷伯菌（KPC-producing Klebsiella pneumoniae，KPC-KP）对CAZ-AVI敏感性降低机制。

2. 研究方法：收集2016年10月-2018年6月苏州大学附属第二医院非重复CRE临床菌株70株；全自动微生物分析仪进行菌种鉴定；PCR扩增并测序比对16SrRNA进行菌种验证；革兰阴性菌药敏板对CRE菌株进行临床常见抗菌药物药敏分析；改良碳青霉烯酶灭活试验（mCIM）对CRE菌株进行产碳青霉烯酶表型检测；PCR法筛选产碳青霉烯酶阳性菌株中的KPC-CRE；多位点序列分型对KPC-CRE进行ST分型；微量肉汤稀释法对KPC-CRE进行CAZ-AVI体外敏感性分析；以CAZ-AVIMIC≤2/4mg/L的KPC-KP为对照组，以CAZ-AVIMIC为4/4mg/L的KPC-KP为实验组，采用PCR结合Sanger测序检测并比对两组KPC-KP中blaKPC，ESBLs基因及外膜蛋白基因；采用qRT-PCR检测两组KPC-KP中blaKPC相对拷贝数及表达量，使用GraphPadPrism5.0软件，采用Welch'st检验进行统计分析。 

3. 研究结果：70株CRE对亚胺培南耐药率达98.6%，对美罗培南耐药率为81.4%；49株（70.0%）为产碳青霉烯酶阳性，其中26株携带blaKPC；25株KPC-KP中23株为ST11；26株KPC-CRE对CAZ-AVI敏感率为100%，其中1株CAZ-AVI敏感性降低KPC-KP，MIC为4/4mg/L；CAZ-AVI敏感性降低及敏感KPC-KP中均携带野生型blaKPC-2以及数种 ESBLs基因，且外膜蛋白OmpK35缺失，OmpK36功能缺陷；CAZ-AVI敏感性降低KPC-KP中blaKPC相对拷贝数及表达量分别是对照组的1.69和2.94倍，差异有统计学意义。 

4. 研究结论：CAZ-AVI对未接受过CAZ-AVI治疗的KPC-CRE具有很强的体外抑制作用，但存在敏感性降低KPC-KP；blaKPC拷贝数和/或表达量增加合并ESBLs以及外膜蛋白缺失和功能缺陷可能会导致KPC-KP对CAZ-AVI敏感性降低。