PATHFAST免疫分析仪快速、定量检测全血与血浆中的D-二聚体
关键词：D-二聚体，深层静脉栓塞，POC床边检测，化学发光免疫测定
摘要：本文的目的为评估新的快速、定量PATHFAST D-二聚体检测诊断临床疑似深层静脉栓塞（DVT）患者的准确性指标。对82例疑似下肢深层静脉栓塞患者（34%患有DVT，66%无DVT），使用PATHFAST免疫分析仪进行D-二聚体（D-Dimer）检测。PATHFAST D-二聚体实验（以化学发光酶免疫测定原理为基础）的对于DVT的诊断价值利用预测临床发病率、加压超声成像（CUS）进行评估。此外，如果必要的话，每个患者要接受X线静脉造影与计算机层析成像。对于阳性诊断率（PPV）与阴性诊断率（NPV）分别为66.7%与100%的DVT诊断，使用0.570?g/mL FEU作为临床临界值的D-二聚体检测的灵敏度与特异性分别为100%与63.2%。PATHFAST D-二聚体与VIDAS D-二聚体结果间的相关性可接受（y=1.134×+0.003, r=0.902）。实验复现性良好（CV%：血浆4.0%-5.0%，全血7.1%-7.5%）总不精密度良好（CV%: 3.6-5.7%）。全血与血浆都可作为此实验样本（肝素化标本：y=1.013×-0.010，r=0.971；柠檬酸盐标本：y=1.068×+0.003, r=0.989）。由于其灵敏性较高，NPV PATHFAST D-二聚体实验可用于在疑似血栓患者中快速排除DVT。
2007 Elsevier Ltd. 版权所有.
引 言
疑似深层静脉栓塞（DVT）很常见，一个生命周期累积发病率为2-5%[1]。加压超声成像（CUS）与X线静脉造影是诊断DVT的最可靠的方法[2]。静脉造影是诊断DVT的金标准，但由于其造影剂引起的创伤与风险使其并不理想。CUS需要熟练的研究员，由于检查的下肢部位不同其灵敏度与特异性变化较大。
D-二聚体是一种交叉纤维素降解产物的混合物，是内源性纤维蛋白溶解的标志，因此可在DVT患者中检测出。回顾性研究指出为使用的检测考虑进一个界定临界值时，用于排除DVT的D-二聚体浓度的阴性诊断率较高[4] 。而且，大量研究证明D-二聚体检测结果阴性与超声波检测正常的患者的抗凝抑制作用安全[5,6] 。
一些D-二聚体检测，包括酶免疫测定、乳胶实验与免疫浊度实验目前都可利用，但它们的临床效率明显不同。其中,与乳胶实验相比较，检测DVT酶免疫测定的灵敏度与阴性诊断率（NPV）较高[7-13] 。一些实验可用于急诊床旁检测（POCT），其中VIDAS D-二聚体实验是DVT诊断或排除的惯用方法。新研发的PATHFAST D-二聚体实验是使用化学发光基质以酶免疫测定原理为基础的灵敏、定量方法。样本为全血与血浆，反应时间只有5分钟。我们进行此项研究的目的是评估使用D-二聚体实验作为筛查检测排除DVT时的诊断价值。
材料与方法
临床样本
此项研究包括82位门诊患者（40名女性，42名男性；年龄：23-85岁；女性：56.1±18.0岁，男性：46.8±17.7岁），涉及我们医院对疑似下肢DVT患者的诊断检查。28名患者诊断为DVT。符合下面任一条件的患者可排除：DVT既往病史，目前症状稳定或目前已进行过抗凝预防。肝素化或柠檬酸盐血液样本（数量=124；女性52，男性72；年龄：24-52岁）来自健康个体，这些个体是日本千叶市Mitsubishi Kagaku Iatron, Inc.的员工，他们已签署知情同意书。血液样本采集到10mL真空管内，里面含有0.129M枸椽酸钠或9IU锂肝素。全血样本在6小时内进行检测。为获得血浆样本，含有抗凝剂的血液样本在2000转/分下离心15分钟以获得缺乏血小板的血浆。血浆样本在6小时内检测或使用前在-40℃或-80℃冷冻储存。稳定性检测表明在-40℃或-80℃储存的样本至少可稳定3个月或更长时间。
深层静脉栓塞的诊断
我们研究所应用的DVT诊断检查以预测临床发病率（根据Wells等提出的得分） [14]与加压超声成像（CUS）（以标准为依据） [15]为基础。而且每个患者要进行X线静脉造影与计算机层析成像。
D-二聚体检测
PATHFAST? D-二聚体实验（Mitsubishi Kagaku Iatron, Inc.，东京，日本）是一种全自动、快速定量化学发光酶免疫测定，用来检测人全血与血浆样本中交叉纤维蛋白的降解产物（D-二聚体）。肝素与柠檬酸盐都可作为抗凝剂来获得血浆。PATHFAST免疫分析仪可通过样本辨识传感器自动区别全血与血浆样本。通过向PATHFAST免疫分析仪输入被检体的红细胞容积数值百分比，全血样本结果可任意修正。无数值调整时，PATHFAST免疫分析仪使用默认血细胞比容值（40%）。检测全血时，制造商建议全血样本分配到PATHFAST试剂盒样本槽后5分钟之内启动PATHFAST D-二聚体检测。PATHFAST D-二聚体实验是PATHFAST分析仪自动运行的一步式夹心免疫测定方法，可用即用试剂进行单一试验，包括共轭D-二聚体单克隆抗体的磁性颗粒与共轭D-二聚体单克隆抗体的碱性磷酸酶。Mitsubishi Kagaku Iatron, Inc.使用的D-二聚体抗体来自于交叉连接纤维蛋白的
