自身抗体多指标检测技术浅析

作者:欧蒙医学诊断(中国)
2021-12-16

由于自身抗体本身的复杂性及多样性,体现在自身免疫性疾病是谱系病,不能单一检测一个指标来定夺,需要同时检测多种自身抗体以协助诊断,因此多指标检测技术的应用就显得尤为重要,这其中最具代表性的是德国欧蒙(以下简称“欧蒙”)的EUROLINE检测技术,可以灵活实现临床诊断中的多重指标分析及批量标本检测需求,是目前使用最广泛、应用最成熟的一种多指标检测技术。近几年不断有新的检测技术加入,如Luminex液相芯片技术,该技术以分布于液相体系中不同标记的荧光微球作为反应载体,具备灵敏度高、操作简便等特点,本文就这两个方法学的基础原理做一些简单的探讨。


总体而言,EUROLINE技术与Luminex液相芯片技术基本原理相同,工作流程相近,详见下表1所示:

表 1 

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接下来详细介绍两种检测技术。欧蒙EUROLINE技术采用将含有抗原的特异性薄膜固定在塑料上,每个膜条上都会含有一个或多个含量稳定的不同检测指标的抗原,目前可支持的抗原种类达到数十余种。以此膜条为载体,实验中加入待测样本,利用抗原抗体的特异性反应,经过温育,清洗,添加酶结合物,酶标二抗与待测样本中的抗体发生特异性的反应,经过温育,清洗,添加底物,底物与酶标二抗中偶联的酶发生反应,显色。通过欧蒙数据处理软件EUROLineScan 将实验结果转换为着色度进行保存。由于EUROLINE每个膜条上可整合约五十个免疫条带,所以使用该产品一次可以同时检测近五十种不同的指标。每次试验只需要15ul的样本量。

  

Luminex液相芯片技术是基于免疫微球的荧光检测技术,把针对不同待测物的抗体分子或者基因探针结合到特定的微球上,每个微球都对应相应的检测项目。通过混合、温育、加荧光标记物、结合、荧光检测的过程,最后使用红激光用来判定微球的荧光编码, 绿激光用来测定微球上报告分子的荧光强度。从而达到快速准确的定量检测目的。由于微球的种类决定了该产品可以同时进行多个指标的检测。


理论上液相芯片技术用于检测的微球种类可多达100种,目前在其配套的自身抗体检测试剂中,以ANA谱检测试剂盒为例,能够提供16种微球,13个为测定微球,3个为质量控制检查微球;所以对于自身抗体的ANA谱检测试剂盒而言,目前Luminex液相芯片能够进行13个指标的检测,略少于欧蒙的EUROLINE产品。以EUROLINE中ANA EL3产品为例,该产品每一个检测膜条均含有多达17个条带,其中15个条带用于指标检测,1个免疫条带用于质量控制;除了定性试剂盒以外,液相芯片技术中也可提供一些定量的试剂盒,在这些试剂盒中会提供4-6支标准品用于定量曲线的制作,进而进行样本的定量。欧蒙的EUROLINE产品可以将检测到免疫条带的显色状态转换为着色度,实现半定量结果处理,检测结果以着色度的方式进行记录、比对;此外为了不断提高检测的准确性,欧蒙也将提供若干定量标准品进行结果分析,实现样本的定量。


由此可见,欧蒙EUROLINE技术与Luminex液相芯片技术基本原理相同,工作流程相近。在自身抗体检测的市场应用方面,EUROLINE技术经历了超过十五年的临床检测应用,无论是从检测项目的组合和开发速度方面,还是从临床的自身免疫鉴别诊断方面,都累积了丰富的产品临床应用经验。据不完全统计,2014年应用EUROLINE技术进行自身抗体检测的检测患者超500万例,中国有近1000家实验室正在使用。


总之,EUROLINE技术作为多指标检测自身抗体的成熟代表,且每年有新的自身抗体检测指标加入,因此不失为目前临床实验室适合和可靠的选择,值得推广和应用。





欧蒙医学诊断(中国)有限公司 张斌 供稿