化学发光免疫分析法优势浅谈 及CM-180全自动化学发光免疫 分析仪的性能评价

众所周知，国内IVD市场对免疫类检测需求量日益增大，各类免疫检测类产品层出不穷，化学发光作为一种检测结果较为准确的方法学，已逐渐替代ELISA免疫检测。

化学反应是以光的形式释放能量，当与免疫分析技术结合使用时，反应所产生的光可以指示样品所含分析物的量，无需采用额外的步骤或者放大分子，而直接化学发光反应即可直接测量光能。化学发光免疫分析法（CLIA）是近三十年来迅速发展起来的非放射性免疫分析方法，是继酶免技术（EIA）、放射免疫技术（RIA）和荧光免疫技术（FIA）之后发展起来的一种超高灵敏度的微量测定技术。

目前临床免疫检测所用技术主要有三类：放射免疫分析、酶联免疫分析和化学发光免疫分析。其现状、优缺点、灵敏度和线性范围的对比情况，如表1、表2、图1、图2所示。

化学发光免疫分析法的具体优势包括：

（1）灵敏度高：理论上化学发光最高灵敏度可达到10-18Mol/L。

（2）检测时间短：每个样本测量光信号时间不超过几秒，从加样到得出分析结果可在9-60分钟之内完成。

（3）检测范围宽：理论上线性量程范围最大可达105个相对发光单位（RLU），即5个数量级。

化学发光免疫分析法按发光剂不同可分为：酶促化学发光免疫分析（CLEIA）、直接化学发光免疫分析（CLIA）、电化学发光免疫分析（ECLIA）。最先进的化学发光技术为电化学发光技术，其次是直接化学发光技术（譬如：采用吖啶脂为发光标记物的化学发光技术），然后是酶促化学发光技术。

按照发光时间长短，化学发光体系类型可分为闪光型（flash type）和辉光型（glow type）两种。闪光型发光时间很短，只有零点几秒到几秒。辉光型发光时间从几分钟到几十分钟，或几小时至更久。闪光型的样本必须立即测量，并配以全自动化的加样及测量仪。辉光型的样本可以使用通用型仪器测量，也可以配套全自动化仪器。图3表示了闪光与辉光及其测量方法的差别。

CM-180全自动化学发光免疫分析仪使用吖啶酯 (AE) 作为化学发光标记，AE在有过氧化氢（H2O2）的稀碱溶液中发光。AE 氧化速度较快，可以在一秒内达到光发射峰值。全自动化学发光免疫分析系统利用免疫分析中抗原抗体特异性结合原理和化学发光中标记抗原抗体结合物的发光试剂释放光子的技术，使血清样本和试剂发生免疫反应和化学发光发应，经过光电系统对光子数量进行测定，精确分析血清中被测物质含量，具有随机、连续、紧急取样和报告快速准确等功能。

一、评价材料和方法

1. 评价材料

1) 样本来源：新鲜人体血清样本

2) 仪器：CM-180 全自动化学发光免疫分析仪

3) 试剂：与仪器配套的试剂(甲状腺素T4试剂盒)

2. 评价方法

参考NCCLS的文件I/LA23-A《放射免疫分析、酶免疫分析、荧光免疫分析、化学发光免疫分析系统质量评估》和I/LA2《免疫测定的临床评估》 及YY-T 1155-2009 全自动发光免疫分析仪。

2.1 温度波动测试方法:将数字测温表的探头插入反应杯内，等待5分钟温度稳定后，每隔30s读取一次温度数据。

2.2 线性检测方法:使用发光剂测试,相邻试剂浓度比为3 ；使用样本针加50uL发光试剂后，加预激发液与激发液发光。

2.3 发光值重复性检测方法:使用发光剂测试0h、4h、8h分别进行测试，使用样本针加50uL发光试剂后，加预激发液与激发液发光。

2.4 发光值稳定性检测方法:使用发光剂测试0h、4h、8h分别进行测试。使用样本针加50uL发光试剂后，加预激发液与激发液发光。

2.5 批内精密度检测方法：选取甲状腺素（T4）项目，用相应的校准物、质控品、试剂盒进行试验。

二、评价结果

1. 温度波动测试结果见如下表3：

依据以上数据可见，CM-180的温控符合YY-T 1155标准确性在设定值的±0.5°C，波动不超过1.0°C要求（行标报批稿要求不超过0.5°C），同时符合行业报批稿的标准要求。

2. 线性评价测试结果见如下表4：

依据以上数据可见，CM-180的线性符合YY-T 1155标准中线性相关系数（r）≥0.99（行标报批稿相同）的要求。

3. 发光值重复性测试结果见如下表5：

依据以上数据可见，CM-180的发光值重复性符合YY-T 1155行业标准报批稿中要求CV不超过5%。

4. 发光值稳定性测试结果见如下表6：

依据以上数据可见，CM-180的批内精密度符合YY-T 1155-2009行业标准中CV≤8%的要求。

三、讨论

近年来，随着医疗技术的发展，免疫检测越来越受到人们的重视，迪瑞CM-180可进行甲状腺、生殖、代谢、心血管、肿瘤、病毒性肝炎、贫血、药物浓度监测等多类系统100余种项目的检测，可在很大程度上提高免疫检测的速度并提升其工作效率。通过对迪瑞CM-180的测试评价得出，其反应区温度波动度为0.05、线性宽度为3.6，线性相关系数为0.997，重复性高值CV为0.26%、低值CV为0.73%，发光值稳定性均小于10%，批内精密度低值浓度CV 为4.91%、高值浓度CV为3.42%，可见CM-180全自动化学发光免疫分析仪反应区温度波动度、线性、重复性、发光稳定性及批内精密度各项指标均符合现行行业标准YY-T 1155-2009及目前报批稿YY-T 1155-20XX的要求，且性能优良，结果表明该产品各项性能指标均满足临床使用和各大医院的需求，值得各大医院参考选择应用。

【参考文献】

[1] I/LA21-A2 Clinical Evaluation of Immunoassays；Approved 

    Guideline

[2] I/LA23-A Assessing the Quality of Immunoassay Systems：

Radioimmunoassays and Enzyme，Fluorescence，and Luminescence Immunoassays；Approved Guideline

[3] YY-T 1155-2009全自动发光免疫分析仪

[4] YY-T 1155-20XX全自动发光免疫分析仪

 迪瑞医疗科技股份有限公司 供稿