青梅煮酒话免疫
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《临床实验室》6月将推出“免疫”专刊，重点关注自身抗检测。为此，我们特意邀请了欧蒙医学诊断(中国)有限公司（以下 简称“欧蒙”）、广州市康润生物科技有限公司（以下简称“康 润”）、沃芬医疗器械商贸（北京）有限公司（以下简称“沃 芬”）、胡曼诊断产品（北京）有限公司（以下简称“胡曼”）、 苏州浩欧博生物医药有限公司（以下简称“浩欧博”）、深圳市亚 辉龙生物科技股份有限公司（以下简称“亚辉龙”）和上海科新生 物技术股份有限公司（以下简称“科新生物”）等国内市场上著名 的免疫诊断产品厂家，请他们畅谈各自的产品、技术与理念，一起 为免疫诊断的现状和未来发展出谋划策、指点迷津。下面就将访谈 的精华部分奉上，希望能为广大检验同仁提供有益的启示。
《临床实验室》：在自身抗体检测领域，间接免疫荧光方法堪称经典的方法学，被认为 是ANA检测的金标准，已作为现代实验室应用的必选方法。请介绍一下目前荧光方法学新进 展以及在自动化方面的发展情况。
欧蒙：自身抗体是自身免疫性疾病的重要标志，其中抗核抗体（ANA）检测在诊疗过程 中的地位无可替代，而间接免疫荧光法（IIF）是检测ANA的金标准，已被国内外众多实验室 广泛采用，但由于该方法学对判读技术要求高，且实验自动化程度低，因此大部分实验室 仍处于手工操作、人眼判读的阶段。应实验室15189/CAP认证等管理需求，实验流程规范化 和标准化已成为急待解决和提升的问题。随着智能化、信息化时代的到来，实验室的手工 操作将逐渐被全自动化的仪器平台取代，对于医院管理来说，不仅仅是提高工作效率，更 重要的是提高实验操作过程的标准化，保证检测质量。欧蒙全自动荧光核型及滴度判读系 统EUROPattern是行业内首先实现专业自动化的仪器，同时也引领全行业向着荧光检测的标 准化、规范化大踏步前进。
欧蒙率先建立“新标准化荧光平台”，以EUROPattern为核心，包含荧光检测全套的自 动化设备、配套试剂、智能化软件，旨在实现间接免疫荧光100%标准化、专业化检测、过程信息化管理。EUROPattern单次最大判读量达500个测试，每个基质只需18s就可以完成 整个操作流程（荧光片识别、点位、对焦、拍照和判读）。目前全自动判读基于115,000份 荧光图片数据库，随着新项目的不断增加，数据库将随时更新。对于大多数的阴性样本， 软件可快速对阴性样本结果一键确认，而少量的阳性样本，EUROPattern将自动得出核型和 滴度的结果，操作人员只需点击鼠标，所有确认的核型及滴度结果会一键回传LIS系统。目 前EUROPattern支持的检测项目包括ANA、ANCA、dsDNA，并且可以胜任单一核型及复合核型 的判读。
凭借自动化检测平台的广泛应用，医院可更加有效的开展室内质控、室间质评、实验 室比对等质控工作，加快建立统一、规范的质控标准，同时也有助于开展大规模的临床 研究，建立自免疾病的应用专家指南，形成从实验室检测流程、质控、出具规范的检测报 告，到临床对检测报告的解读、对疾病诊断的说明，最终实现检测结果的标准、互认
《临床实验室》：随着临床实验室的发展，自动化、智能化已经成为潮流，请问在自身 抗体检测领域自动化发展的程度如何呢？
康润：自身抗体检测是临床实验室中为数不多仍采用手工操作的项目，实现自动化， 是检验工作者梦寐以求的。2014年康润引进了德国AESKU公司专门应用于自身抗体间接免 疫荧光检测的全自动平台——全自动间接免疫荧光法分析仪（HELIOS）。HELIOS有效地解 决了IFA实验自动化加样、加试剂、清洗、封片，以及结果的自动判读问题；实现了实验 前端染色与后端图像采集、结果判读（阴阳性、滴度、核型）的全自动处理，解决了长期 以来的荧光实验全自动难题，是目前市场上先进的荧光自动化实验系统，也是一款真正全 自动的荧光实验系统。全自动免疫印迹分析仪(HELIABLOT)是近年来出现的自身免疫性疾病 检测的先进仪器，仪器结构一体化，样本处理和结果判读集成一体；HELIABLOT提高了检 测工作效率，专利的三针自动加样系统可以实现单槽管理、避免样本污染；采用一个高度 敏感、500万像素CMOS传感器摄像头，集成一体全自动成像，成像速度快，清晰度高，判 读软件自动扫描分析结果，标准化判读可以避免主观判断结果带来误差，提高检测的稳定 性和准确性。在自身抗体检测领域的科研创新，康润从未止步，2018年，康润重磅推出了 KAESER6600吖啶酯直接发光系统，该系统单位面积通量可达320T/h，同时系统装载的独家智 能化重测功能，可依据历史检测结果，自动对样本进行原倍或稀释检测，不仅避免了手工 稀释带来的误差，还极大的节约检验科工作人员的时间成本，真正达到智能高效。
全自动化系统可大大提高实验室的工作效率，有效消除人为因素所造成的干扰，由于减 少了人工结果干预，可减少病人前后实验结果的人工判断误差，并且可参与相关实验室的 结果比对，符合国家对于提高不同实验室结果互认的要求，也大大降低了病患医疗花费， 提高结果的临床认可度。
沃芬：沃芬在推动自身抗体检测的自动化方面做过很有益的开拓。BIO-FLASH是全球第 一家采用化学发光技术系统解决自身抗体检测的全自动平台，于2011年正式问世，2015年 进入中国市场。这台设备在当时研发的背景是：虽然有多种自身抗体的检测技术，但是临 床需求的定量检测还是以酶免为主。对于临床及实验室使用酶免技术解决自身抗体定量检测的主要问题是，为了减少试剂的定标损耗，节省人工成本，往往需要积攒一定数量的样本才进行成批检测，等待最优的样本数量往往增加报告周转时间。而如果项目种类多，酶免方法操作起来则有诸多不便。实验室同时面对酶免技术带来较大批间批内的CV、二抗不稳定、TMB底物易污染等问题。而较窄的检测线性需要对高值样本反复稀释才能满足临床对定量结果的需求。BIO-FALSH就是基于这样的背景下研发的。其最主要的特点是：自免全菜单，项目随机组合，即来即做，更好的敏感性及特异性，更宽的检测线性范围，优秀的稳定性，低耗材成本，高效小巧，不占用实验室宝贵的空间，30分钟之内就可获得首个报告。
此外，QUNATA Lyser 3000是我们最新一代的酶免荧光一体机，旨在解决自身抗体检测两个技术方法的自动化问题。QL3000能够同时处理240个样本，多达6块酶标板及30张荧光玻片。通过内置的读码器能够扫描所有样本及试剂耗材信息，根据LIS传输的检测项目，为样本匹配荧光玻片及配置样本孔，并加强荧光阳性样本的跟踪。QL3000配合机械臂AUTO Loader及荧光自动判读设备NOVA View能够实现荧光玻片从处理到核型滴度输出的全自动过程。
胡曼：自动化是现代化实验室发展的重要方向。2019年CACLP，胡曼展出了全自动免疫印迹仪HumaBlot 44FA。HumaBlot 44FA能实现免疫印迹产品的全自动化操作，全程可实现无人值守。从支持原始采血管直接上机检测，到自动加样和随后的自动结果判读，真正实现了免疫印迹产品的自动化整体解决方案。在此同时，一次实验能实现44人份3个不同项目的同时检测，组合更为灵活。作为最新一代全自动免疫印迹工作站，内置了干燥加热模块，缩短了免疫印迹产品干燥的时间，实验更快捷；软件系统采用模块化设计，操作更简单；并与医院信息传输系统完美兼容，结果回报更及时、准确。
《临床实验室》：本期刊登了几篇很有分量的关于自身免疫性肝病的文章，诸位当中谁想先介绍一下自己在这方面的产品呢？
康润：康润生产的自身免疫性肝病抗体谱检测试剂盒（免疫印记法）可定性检测人血清或血浆中针对线粒体M2型、Sp100、LKM-1、gp210、LC-1和SLA等抗原的IgG自身抗体，一次检测6项结果，快速准确。内含Cut-off质控线，结果判读更简易、客观、准确；可手工操作，亦可配套全自动检测系统，操作、判读自动化。我们生产的自身免疫性肝病抗体谱检测试剂盒（免疫印记法），筛选和使用灵敏度高、特异性好、性能稳定的国外一线厂家生物原材料，并经过系统性研究和优化，测试大量质控品和临床样本，确定最佳制备条件和各项生产工艺，从源头上保障了试剂盒质量的可靠性。康润还建立了完整的生产质量管理体系以及各项生产的SOP，并要求在生产中严格按照标准执行。有力地保障原材料、中间品及成品的检验规范和质量标准。康润以“精准诊断、润泽健康”为使命，持续为客户提供高质量的医学诊断产品。
胡曼：胡曼的IMTEC-自免肝-LIA及IMTEC 酶联免疫吸附法（ELISA）自免肝检测系列产品可以为ALD的鉴别和诊断提供重要信息。LIA产品最大特点是可以在同一硝酸纤维素膜上同时检测多种自身抗体，ELISA产品最大特点是可以针对单一自身抗体提供定量检测结果。胡曼作为全球第一家开发出自身抗体LIA产品的企业，拥有近三十年自身抗体的研发和生产经验，胡曼的LIA产品包括function control和cut-off control的双重质控体系，符合欧洲最高质控标准。胡曼自免肝LIA产品包括6种自身抗体，覆盖了AIH和PBC最常见的自身抗体，一次检测即可为临床医生提供6种自身抗体的检测结果。
《临床实验室》：最近几年，越来越多的自身免疫性疾病受到临床的广泛关注，比如原发性膜性肾病、特发性炎症性肌病等，请问关于这两种疾病有什么推荐的诊断试剂吗？
欧蒙：膜性肾病是导致成年人肾病综合征的最常见原因，也是目前肾内科门诊就诊率最高的疾病之一，其中pMN在膜性肾病中占70-80%。pMN属于自身免疫性疾病，临床已证实抗磷脂酶A2受体抗体（PLA2R）和抗1型血小板反应蛋白7A域抗体（THSD7A）是pMN重要的血清学标志物。抗PLA2R与抗THSD7A可为临床pMN诊断提供重要的辅助依据。对于pMN反复检测对疾病活动度、疗效监测和预测复发也至关重要。欧蒙抗PLA2R和抗THSD7A抗体检测试剂是目前全球独家的血清学诊断专利技术产品，可同时提供IFT和ELISA两种方法学，分别满足初诊筛查及临床跟踪随访、疗效监测的合理选用。并且检测性能具有高灵敏度及特异性：单独检测抗PLA2R抗体敏感性高达80%、特异性高达99%；联合抗THSD7A抗体检测，血清学检出率最高达到85%。此外，为避免实验室误差、提高检测工作效率，欧蒙还可提供配套的自动化平台，包括间接免疫荧光全自动操作系统（Sprinter XL）、全自动免疫荧光核型及判读系统（EUROPattern）和全自动免疫分析仪，不仅全面变革了IFT检测工作流程，实现了荧光核型和滴度判读的完全标准化检测流程，同时还改善了ELISA高通量全自动一体化操作，更加准确、快速、标准。
至于您刚才说的特发性炎症性肌病，又称自身免疫性肌炎，是一组病因未明的四肢近端肌无力为主的骨骼肌非化脓性肌病，其中免疫介导的肌肉损伤是最显著的临床特征。尽管肌活检被看作最为敏感的检测手段，但由于组织病理检测常出现不均一或不明确的情况，血清中的自身抗体仍然是IIM的重要诊断依据。尤其是肌炎特异性自身抗体已成为最基本的检测手段，并被纳入欧洲神经肌肉疾病中心和美国肌肉研究协作组（ENMC）联合推出的IIM新的诊断分类标准中。肌炎特异性自身抗体检测除用于IIM的诊断外，还有利于多种类型肌病的鉴别诊断，如皮肌炎、多肌炎、肿瘤相关肌病等，尤其是近年新发现的一些肌炎特异性抗体（TIF1γ、MDA5、NXP2、SAE1），还可预示伴发肿瘤、预后不良等。在此基础上，联合应用肌炎相关性自身抗体，对其他病症的伴随发生或严重程度也具有一定的提示作用。欧蒙抗肌炎抗体谱（免疫印迹法）是目前市面上检测项目最多、最全的产品，涵盖多至16项指标，血清学诊断信息全面，有效提高疾病检出率，结合ELMP全自动免疫印迹仪，以实现单次100人份的高通量检测效率及全程信息化的规范管理，完全满足临床实际诊疗需求。
《临床实验室》：国内目前已经有企业开发出了第四代技术(即磁微粒化学发光技术)应用于自身免疫检测的系列产品，能否简单介绍下磁微粒化学发光产品的特色及优势？
浩欧博：自身抗体检测作为临床免疫检测领域的一个组成部分，其检测技术的发展始终伴随着免疫检测技术的发展。上世纪50年代起自身抗体检测技术主要基于传统的方法学开展，包括间接免疫荧光法（IFA）、乳胶凝集法（LA）、双向免疫扩散法（DID）和放射免疫法（RIA）等。1971年后，包括酶联免疫吸附法（ELISA）、荧光免疫检测技术（FEIA）和以多项联检为特点的线性免疫检测技术（LIA）也逐步应用到自身抗体检测领域。上述自身抗体检测技术存在自动化程度低、检测敏感度差、特异性不高、纯粹定性检测以及影响因素多等一系列现实问题。化学发光法（CLIA）作为先进的免疫学检测技术，目前已经被广泛应用于临床免疫相关项目（包括肿瘤标志物、传染病、激素等）的检测。直到2012年，该技术和方法才逐渐被应用到自身抗体检测领域。浩欧博在国内率先开发出了纳博克磁微粒化学发光自身抗体检测平台。此外，除目前市场流行的第二代（2G）和第三代（3G）过敏和自免产品外，浩欧博还掌握了纳米磁微粒全自动化学发光免疫诊断技术（4G），可实现自动化、定量化、精确化、个性化多维度检测。
这里我还想多说几句，谈谈化学发光检测技术在自身抗体检测上的应用，以及化学发光检测技术是如何从全自动的检测系统、更宽的检测线性范围、更高的检测敏感度、更方便灵活的实验流程等几个方面给自身免疫疾病的临床诊断带来全新改变的。
（1）全自动的检测系统
化学发光检测方法是一种基于高度集成的自动化仪器设备配套专属试剂的检测系统。在样本和试剂处理方面，化学发光仪器可实现样本和试剂的条形码识别、自动稀释、自动加样以及检测结果的自动存储和传输等功能，真正实现了整个检测流程的自动化。与全自动操作相比较，传统方法的手工操作存在工作效率低下、人力成本增加、实验室生物安全性降低以及结果人为干扰因素多等一系列问题。在检测质量控制方面，化学发光仪器的软件系统由于整合和内嵌有完整的校准主曲线、不同批次的质控及校准结果、标准质控效果图等，因此能够在整个检测过程中全程监控检测结果的质量，确保每个检测结果的准确性和可靠性。在试剂管理方面，化学发光仪器借助软件系统实现试剂的在机信息管理（包括试剂条形码识别、试剂存余量的提示、试剂在机稳定性时限显示以及试剂冷藏保存等），确保检测试剂的长期稳定并避免反复离机和在机所造成的潜在污染等情况的发生。
（2）更宽的线性范围
与传统的免疫检测技术相比较，化学发光检测技术具有更加优越的检测线性范围，因此能够更精确和客观地反映出患者抗体水平的改变情况。目前已有的研究表明，抗谷氨酰转移酶抗体（anti-tTG）以及抗双链DNA抗体（anti-dsDNA）等抗体在针对麸质过敏性肠病以及系统性红斑狼疮的疾病活动度等方面具有高度相关性，而由于CLIA方法具有更宽的检测线性范围，因此CLIA针对上述两种抗体的检测结果，与临床疾病活动度的相关性更高。
（3）更高的敏感度
化学发光检测技术的检测灵敏度可以高达10-18mol/L，这意味着该检测技术可以显著提升自身抗体检测的敏感度。已有的研究表明，由于大部分自身免疫疾病均为慢性疾病，整个疾病发展过程往往持续数年。而此时自身抗体往往会早于临床症状出现，并具有重要的疾病预警价值。化学发光检测技术应用于自身抗体检测，将进一步促进自身抗体检测结果在临床实践的应用范围，尤其是针对健康人群中自身免疫疾病的筛查价值。良好的检测敏感度可以确保更多的无临床表现的自身免疫疾病潜在患者能够及时发现和确认。
（4）更方便灵活的实验流程
化学发光检测系统可以借助软件系统，实现样本和试剂的随机化管理、检测项目的灵活组合以及更高的检测通量（检测结果缩短到30分钟以内，测试速度高达360测试/小时）等显著的优势，从而不断提升自身抗体检测方面的工作效率。样本和试剂的随机化管理功能可以完全消除批处理的各种弊端，实验室无需积攒样本，患者和医生也不必长时间等待同时对于需要尽快出具检测结果的急诊样本更可以开展优先检测，从而大大提高整个医疗活动效率。而检测项目的灵活组合则可以确保临床医生针对不同患者的临床疾病、个体特点和经济基础等差异因素开展个性化的自身抗体检测服务，避免由于固化组合检测所带来的不必要检测，节省医疗资源。
《临床实验室》：我们还想了解一下，国内的IVD企业在自身抗体检测的国内市场拓展和产品质量保证上做了哪些工作？
科新生物：我先谈谈市场拓展方面。自身免疫诊断产品一直是科新生物的重点专业领域。风湿免疫专业在我国只有三十多年历史，仍是比较年轻的学科。由于学科年轻、专科医疗资源分布不均衡，风湿免疫科医师主要集中在大型综合性医院，尤其是三甲医院，而在基层医院几乎没有该专业的专科医生。风湿免疫疾病是“疑难杂症”，其症状不典型，很容易造成误诊、漏诊，疾病晚期患者常出现多系统累及，生存质量严重降低甚至导致死亡。因此，风湿免疫疾病的早诊断早规范治疗就显得尤为重要，自身抗体检测就是医生和同道们战胜疾病的重要武器。科新生物为各级医疗机构提供可靠且专业的自身抗体检测解决方案。在高端医院方面，我们与国内外专家团队合作，进行科研成果转化、新技术平台引进，满足高端医院科研、创新、成果转化和临床诊治的需要。在基层医院方面，积极参与风湿免疫疾病医联体联盟的活动与建设，与业内专家和同道一起把适宜的诊疗技术带到基层。科新生物基于自身生物抗体药物的研发平台基础，自进入自免诊断领域伊始率先自主研发了多种自身抗体检测用核心生物原料——抗原。基于有自主的可靠抗原，我们在原有酶免法、印迹法产品基础上专门开发了适用于体检筛查、基层医院门诊筛查需要的自身抗体简便快速解决方案。该解决方案可以实现5分钟快速检测抗环瓜氨酸肽（CCP）抗体、M2型线粒体抗体（AMA-M2）和ENA7项抗体。该检测产品可以不依赖设备实现检测，试剂可常温保存，无需冷链运输，最大限度地降低了有自身抗体检测需求的用户项目开展门槛。此外，我们还把自身抗体筛查检测推广到体检机构，促进疾病更早发现更早诊断。
谈完了市场拓展，我再谈谈公司质量保证方面的努力。科新生物一直把质量作为企业的生命线。进入自免诊断领域伊始，我们就深刻意识到真正决定产品品质的是核心生物原料的质量。无论使用何种检验技术平台，没有优质可靠的原料，就没有优质可靠的质量。相反，具备了优质可靠的生物原料就具备了产品不断改进、优化的基础，就具备了在各种检验技术平台生产优质产品的基础。核心技术靠化缘是要不来的，只有自力更生！科新生物为保证产品质量，基于生物药物的技术储备基础自主研制了抗原，实施ISO9000和ISO13485建立全面质量管理、保证体系，不断提高本公司的的质量保证能力。在有质量保证的基础上，我们建立的用户用户反馈系统，为产品不断改进与升级做足准备。
《临床实验室》：我们知道亚辉龙研发生产出了国内第一台超高速吖啶酯直接化学发光仪（iFlash 3000），能否给我们介绍一下这款产品的性能和特点？
亚辉龙：我先简单介绍一下公司情况，亚辉龙成立于2008年，主要从事生命健康产业之生物诊疗产品的研发、生产、销售和服务，历经十年的发展，已成为中国自身免疫诊断知名品牌并且专注服务于生殖健康、糖尿病、感染免疫领域，是一家拥有大量自主知识产权医疗器械产品的国家高新技术企业。于2016年推出了中国第一台超高速吖啶酯直接化学发光仪（iFlash 3000化学发光免疫分析仪） 。
这款超高速吖啶酯直接化学发光仪（iFlash 3000）检测优势包括：闪光型发光集中，发光效率高，检测速度快，低背景值，高灵敏度，小分子吖啶酯对抗原抗体结合影响小。
产品特点：
① 先进的化学发光技术
采用吖啶酯直接化学发光技术，不需要催化剂，背景发光值低，信噪比高，发光反应干扰因素少。光子释放快速集中、发光效率高、发光强度大，检测速度快。采用小分子吖啶酯，对标记的抗原、抗体活性没有影响。
另外，采用高效的磁微粒免疫技术，高比表面积，灵敏度高，检测速度快，加上四重磁分离，实现最佳的洗涤效果，重复性好。
② 高通量检测
iFlash 3000可同时容纳140个样本检测，样本可在机不间断添加，支持随时装载。同时具有单独的急诊位，满足急诊样本优先处理需求，做到随到随测。高通量检测可让实验室实现对来自不同科室的样本能够在一台机器上即可完成检测。
③ 检测速度快
系统检测速度最大可达300 测试/小时，最快在12min内报告第一个结果，测试结果可当天报告。支持模块化联机，智能拓展，智享高速，支持2~4个iFlash 3000模块联机，整机测试速度可高达1200测试/小时。
④ 完善的检测菜单
iFlash 3000具有完善的检测套餐，涵盖自身抗体、肿瘤、激素、甲状腺功能、心肌梗塞、贫血、骨代谢、TORCH、呼吸道病毒、肺炎、生殖健康等112个检测项目，可灵活地设置项目组合，极大方便了临床诊断。除常规检测项目外，还具AMH、Inhibin B、肺炎支原体抗体IgM、肺炎支原体抗体IgG、锌转运蛋白8抗体、脂联素、磷脂综合症相关检测8项等特色项目，满足不同检验科室检测和科研需求。
