高效液相色谱法与液相色谱-串联质谱法检测人血清中脂溶性维生素的一致性评价
周立，博士，现任北京豪思生物科技股份有限公司首席技术官，拥有逾20年色谱和质谱设备和方法研发经历，独立或者与他人合作在包括Science，Nature Method，JACS，JBC等知名刊物上发表共40余篇具有影响力的科学论文，获授权发明专利120余项，主持国家级项目2项，美国化学学会、美国真空学会、美国质谱学会、中国化学学会、中国物理学会、中国质谱学会会员。
李幽然，首都医科大学附属北京妇产医院检验科，检验技师，临床质谱检验中心组长。2016年毕业于首都医科大学，硕士研究生。2017年担任中国医师协会检验医师分会-临床质谱检验医学专业委员会秘书。2018年进入北京妇产医院临床质谱中心工作，负责仪器维护、项目开发、性能验证、常规临床质谱项目的检测以及研究生质谱教学工作等。开发的项目主要有维生素、雄性激素、红细胞叶酸、胆汁酸、药物浓度、抗生素残留等临床质谱检测项目。发表多篇sci文章。2022.03担任首都医科大学附属北京妇产医院临床质谱检验中心秘书。
为比较北京豪思生物科技股份有限公司研发生产的高效液相色谱法脂溶维生素检测试剂盒（评估方法）与液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS，参比方法）检测方法检测脂溶性维生素的一致性。收集2021年5-9月首都医科大学附属北京妇产医院及北京协和医院健康查体剩余血清标本191例和167例，分别由评估方法及LC-MS/MS检测脂溶性维生素A/E和25-羟基维生素D。用Bland-Altman图分析两种检测方法的一致性。
一、材料与仪器
临床样本，来自2022年首都医科大学附属北京妇产医院检验科的脂溶性维生素ADE检测的血清样本191例；甲醇，乙腈、异丙醇，均为色谱纯；超纯水；维生素A/E测定试剂盒（液相色谱法）及25-羟基维生素D测定试剂盒（液相色谱法），湖南豪思生物科技有限公司；维生素A/E测定试剂盒（液相色谱-串联质谱法）及25-羟基维生素D测定试剂盒（液相色谱-串联质谱法），北京豪思生物科技股份有限公司。
高效液相色谱仪，睦仪ARIES LC 2300，湖南豪思生物有限公司；液相色谱-串联质谱仪SCIEX 5500；涡旋混匀仪；离心机。
二、试剂盒与方法
1. 液相方法：维生素A/E测定试剂盒（液相色谱法）及25-羟基维生素D测定试剂盒（液相色谱法）两款试剂盒及方法均为湖南豪思生物科技有限公司提供。
2. 质谱方法：首都医科大学附属北京妇产医院实验室自建维生素A/E检测方法及自建25-羟基维生素D检测方法。
三、结果与分析
1. 色谱保留时间及谱图：
2. 方法性能评价：
3. 高效液相色谱法与液相色谱-串联质谱法测试人源样本的结果比对：
通过比对在睦仪ARIES LC 2300高效液相色谱仪与AB Sciex5500串联液相质谱平台检测的191例样本，比对结果显示在睦仪ARIES LC 23000液相色谱仪上测试维生素A/E与AB Sciex5500串联液相质谱测定的结果已满足95%的点都落在一致性界限内，差异样本较少，因此可认为两种方法对同一样本的定量测量维生素A/E值一致性程度较高。
通过比对在睦仪ARIES LC 2300高效液相色谱仪与AB Sciex5500串联液相质谱平台检测的167例样本，检测出25-羟基维生素D3和25-羟基维生素D2的样本中95%左右的试验试剂与参比试剂测定值的差值百分比在95%一致性限内，表明试验试剂与参比试剂25-羟基维生素D检测结果具有良好的一致性。
四、 结论
1. 在方法学评价中，高效液相色谱法的线性、精密度、准确度评价，均符合方法学要求。
2. 高效液相色谱法与液相色谱-串联质谱的结果一致性基本一致。
总体而言，高效液相色谱法与液相色谱-串联质谱法在测定临床样本中维生素A、维生素E、25-羟基维生素D3、25-羟基维生素D2具有较好的一致性。高效液相色谱设备价格便宜、维护简单和维护成本低、对使用人员技术要求低、设备运行环境要求低、方法前处理简单，在临床检验维生素A/E和25-羟基维生素D方面能够很好的代替液相色谱-串联质谱。
